丙泊酚对小鼠成肌细胞自噬的影响及其机制的研究

发布时间：2021-03-01 07:15

　　近年的研究表明,丙泊酚不仅在动物的脓毒症休克中有保护作用,在器官和细胞的缺血/再灌注（I/R）、氧化应激损伤中同样有保护作用。丙泊酚对心肌细胞和海马细胞的保护作用就表现为保护心肌细胞和海马细胞对抗I/R的自噬性细胞死亡。包括丙泊酚、七氟烷在内的全麻药都会上调骨骼肌的自噬行为,这种自噬现象在全麻过程中呈时间依赖性逐渐上调,并在六小时时达到高峰,且去神经支配与全麻状态缺一不可。但是,关于丙泊酚发挥对自噬的促进作用是通过何种更具体的分子机制,以及是否能够对实际的临床用药有指导意义的相关研究很少。自噬是胞质溶胶和细胞器被隔离到双层膜的小泡中后运送到溶酶体/空泡中降解,并使形成的大分子进行再循环的一个过程。自噬过程发生时,细胞会消化掉自身的一部分,即self-eating,这个过程初一看似乎是不利于细胞的。但事实上,如果没有诱发因素存在,正常情况下细胞只维持较低程度的自噬以维持自稳。而所谓的诱发因素,既有来自于细胞外的诸如外界中的营养成分不足、缺血、缺氧、生长因子的浓度的变化等,也有来自于细胞内的,比如细胞内的代谢压力、衰老或破损的细胞器堆积、蛋白质折叠错误或异常聚集等。但是在细胞存活和生长的过... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
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主要英文缩写词表
第1章 引言
第2章 综述
    2.1 丙泊酚的非麻醉活性
        2.1.1 丙泊酚的抗癌活性
        2.1.2 丙泊酚的神经保护作用
        2.1.3 丙泊酚对癫痫持续状态的作用
        2.1.4 丙泊酚对免疫调节的作用
        2.1.5 丙泊酚对血小板聚集的作用
        2.1.6 丙泊酚对器官的保护作用
        2.1.7 丙泊酚对疼痛的作用
        2.1.8 丙泊酚的遗忘效应
        2.1.9 丙泊酚的减少呕吐的作用
        2.1.10 丙泊酚对自噬的作用
    2.2 自噬
        2.2.1 自噬的概述
        2.2.2 自噬的调控机制
        2.2.3 自噬与活性氧簇
        2.2.4 自噬与内质网应激
第3章 实验研究
    实验一 丙泊酚对C2C12（小鼠成肌细胞）自噬的影响的研究
        1 材料方法
            1.1 细胞株
            1.2 主要试剂和仪器
                1.2.1 实验材料和试剂
                1.2.2 主要仪器
            1.3 液体试剂的配制
        2 实验步骤
            2.1 C2C12细胞株的培养、冻存、复苏和传代
                2.1.1 细胞培养
                2.1.2 细胞复苏
                2.1.3 细胞传代
                2.1.4 细胞冻存
            2.2 丙泊酚处理后细胞活性测定实验
                2.2.1 细胞活性测定实验-CCK8法（cellcountingkit-8）
                2.2.2 丙泊酚处理后的凋亡实验
                2.2.3 丙泊酚处理后的活性氧簇（ROS）检测
            2.3 自噬相关蛋白表达的检测
                2.3.1 实时定量PCR
                2.3.2 westernblot检测自噬相关蛋白表达情况
                2.3.3 免疫荧光法检测自噬相关蛋白表达量
            2.4 自噬抑制剂对丙泊酚促进自噬的作用
                2.4.1 实验分组
                2.4.2 Westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3、p62
                2.4.3 流式细胞术检测细胞凋亡
            2.5 统计学分析
        3 结果
            3.1 丙泊酚对细胞增殖及凋亡的影响
            3.2 不同浓度丙泊酚对分化后的小鼠成肌细胞株C2C12细胞自噬的影响
            3.3 自噬抑制剂氯喹二磷酸（CQ）对丙泊酚促进自噬的影响.
        4 讨论
    实验二 丙泊酚促进C2C12（小鼠成肌细胞）自噬机制的研究
        1 材料方法
        2 实验步骤
            2.1 C2C12细胞株的培养、冻存、复苏和传代
                2.1.1 细胞培养
                2.1.2 细胞复苏
                2.1.3 细胞传代
                2.1.4 细胞冻存
            2.2 丙泊酚促进自噬的信号通路相关蛋白表达的研究
                2.2.1 蛋白收集
                2.2.2 蛋白定量
                2.2.3 蛋白免疫印迹法
            2.3 抑制内质网应激对丙泊酚促进自噬的影响的研究
                2.3.1 westernblot检测内质网应激相关蛋白BipCHOP的表达
                2.3.2 H2-DCFDA检测细胞内活性氧簇（ROS）水平
                2.3.3 丙泊酚对细胞内钙离子的影响及其机制的研究
            2.4 抑制活性氧簇（ROS）对丙泊酚促进自噬的作用的影响
                2.4.1 实验分组
                2.4.2 H2-DCFDA检测细胞内活性氧簇（ROS）水平
                2.4.3 westernblot检测自噬相关蛋白
        3 结果
            3.1 丙泊酚通过AMPK-MTOR通路激活自噬
            3.2 内质网应激抑制剂TUDCA对丙泊酚诱导的自噬的相关蛋白表达的影响
            3.3 内质网应激抑制剂和自噬抑制剂对丙泊酚处理后细胞内的ROS的影响
            3.4 ROS增加对丙泊酚促进自噬的作用的影响
            3.5 内质网应激抑制剂对丙泊酚调节钙离子水平的影响
        4 讨论
第4章 结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3057131