罗哌卡因破坏细胞自噬、抑制肿瘤生长并缓解机械性疼痛

发布时间：2021-03-04 14:57

　　背景:目前旧药的新功能引起越来越多的关注,特别是用于癌症治疗方面,且治疗同时很少能缓解癌症疼痛。自噬是一种重要的生物降解过程,与癌症的发病机制密切相关。自噬介导有缺陷的细胞器、错误折叠或聚集的蛋白质和某些长寿命分子的再利用,以调节细胞稳态。自噬在癌症中发挥双重作用,既可以抑制细胞凋亡促进既定肿瘤的生长,又可以通过阻止受损蛋白质和细胞器的累积起到肿瘤抑制的作用。肿瘤所处的微环境营养匮乏。在营养匮乏压力下,细胞可通过细胞自噬获取能量,度过“难关”。因此,通过调节自噬,或许可以抑制癌症的发展和转移,杀死癌细胞,增强化疗药物的抗肿瘤作用。罗哌卡因是一种临床上常用的氨基酰胺类局部麻醉药,主要用于外科手术,分娩和术后镇痛。本课题的主要目的是为了探讨罗哌卡因是否可以参与癌症治疗新作用以及自噬在其中所扮演的角色。方法:将Hela细胞和B16细胞分为对照组（Control）,饥饿组（Starvation,Starv）,罗哌卡因组（Ropivacaine,Rop）,氯喹组（Chloroquine,CQ）,饥饿+罗哌卡因组（Starv+Rop）,饥饿+氯喹组（Starv+CQ）,罗哌卡因+氯喹组（Rop+C... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

机械性疼痛检测设备架（左），电子VonFrey触痛仪（右）

图 2.罗哌卡因与 CR 联合处理对肿瘤生长及癌性痛的影响2.6 组织提取及保存将小鼠用戊巴比妥麻醉（50 mg／kg），将 PBS 缓冲液注入左心室，剪开右心耳使血液流出，随后在冰上操作完整取出肿瘤，切取部分肿瘤组织放入 4％多聚甲醛中固定。剩余肿瘤组织置于冷冻管中放入液氮速冻保存。在多聚甲醛中固定 4 小时之后的肿瘤组织需要弃去多聚甲醛再用 30%蔗糖溶液（蔗糖 9 g+去离子水定容至30 ml）脱水过夜，弃去，再用 OCT 包埋剂包埋，最后放入-80℃冰箱保存。2.7 免疫印迹实验2.7.1 细胞蛋白提取将细胞接种到细胞培养板中，细胞贴壁后处理，收样时弃去培养基，用 PBS 洗 3遍，弃去，然后向每孔中加入 1×SDS sample buffer 缓冲液 60μl，再用塑料刮仔细刮下。再用 200μl 移液枪吸尽收集到 1.5 ml 的 EP 管里，放入沸水中煮 15 分钟，

3. 罗哌卡因引发自噬体形成 Hela 细胞用饥饿处理 1.5 小时或者用罗哌卡因（1.5mM）处理 5 小时。 将 B16 细胞用饥理或用罗哌卡因（1mM）处理 4 小时。（a）GFP-LC3-HeLa 的免疫荧光图像或自噬体标 LC3 的免疫荧光染色（B16 细胞，绿色）。（b，c）LC3 荧光阳性细胞百分比的统计结果d）LC3I，LC3II 和β-actin 的免疫印迹结果。（e，f）LC3II 与β-actin 的比例的定量。 RO哌卡因，Starv：饥饿。 比例尺=5μm。数据表示为平均值±标准误，* p <0.05，** p <0.0** p <0.001。.2 罗哌卡因破坏自噬性溶酶体再生自噬过程中由于自噬溶酶体的形成，溶酶体被大量消耗[7,20]，这一问题可以通LR 过程产生新的溶酶体来解决[21]。在自噬溶酶体完成降解后，自噬溶酶体通LR 过程延伸出一个管状结构并从上面产生出一个新的溶酶体，然后通过获得和降解能力成为功能性溶酶体，这对于维持溶酶体稳态是至关重要的。LAM溶酶体膜蛋白，被用作溶酶体标记物。 因此，具有 LAMP1 和 LC3 的重叠信


本文编号：3063424