长链非编码RNA H19在老化心肌缺氧后处理中的作用及机制研究

发布时间：2021-03-09 03:01

　　研究背景:缺血后处理可通过激活内源性保护通路减轻组织缺血再灌注（I/R）损伤,但是其在老年患者中是否仍存在保护作用尚存争议。长链非编码RNA（lncRNA）H19在缺血性疾病中发挥着重要作用,但是其在老化心肌中的功能尚不明确。在临床和基础研究中,右美托咪定具有心肌保护作用,但其在老化心肌I/R损伤中发挥的功能和机制仍待进一步研究。RNAN6-甲基腺嘌呤甲基化（N6-methyladenosine,m6A）是内源性最为常见的RN A修饰方式。有研究表明,肿瘤细胞缺氧后会引起细胞总体的RN A m6A修饰增加,而lncRNA本身也可被m6A修饰。因此本研究将探讨H19在老化心肌缺氧后处理及右美托咪定缺氧后处理中发挥的作用及机制,缺氧后处理及右美托咪定缺氧后处理对老化心肌细胞RNA m6A的修饰水平的影响,RNA m6A修饰调控基因对lncRNA H19表达调控以及其在老化心肌缺氧复氧、缺氧后处理中发挥的作用。实验方法:分离培养原代心肌细胞,用分别用0g/L,5g/L,10g/L,20g/L,40g/L浓度D-半乳糖处理加速细胞衰老,使用SA-β-gal染色及衰老相关蛋白检测衰老情况。原代正... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－２．尤原代细胞经〇ｇ，?５ｇ，?１０ｇ，?２０ｇ，４０ｇ／ＬＤ－半乳糖分别处理２４ｈ，?４８ｈ，?９６ｈ，?ＣＣＫ－８检测??

别为?Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ?和?４０ｇ／Ｌ，并分别于?２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ?后用?ＣＣＫ－８?检??测细胞生长情况，记录ＯＤ４５０值，每组三个复孔，计算细胞活力。结果发现不同Ｄ－??半乳糖浓度处理的心肌细胞后，随干预时间及浓度的增加细胞活力下降（图１－２?Ａ）。??Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ??８０－｜????ｒｆｆｍｉ??…卜ｉ?ｉ??ｓ—?ｉ＊?ａ?■ｉｌｌ??２〇ｇ／｜＿?４０ｇ／Ｌ?Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ?２０ｇ／Ｌ?４０ｇ／Ｌ??图１－２．?Ｂ．使用ＳＡ－Ｐ－ｇａ丨对经《ｇ，?５ｇ，?Ｉ０ｇ，?２０ｇ，?４０ｇ／Ｌ?Ｄ－半乳糖处理的原代心肌细胞进行染色，??Ｕ－算细胞染成蓝色的比例．＿（Ｆ＝１（丨．５９－?／＂＝〇．（＞〇（＞６：?＞＜０．０５?ｖｓ?Ｕｇ／Ｌ?姐）。??提取的原代心肌细胞种至６孔板，使用Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ浓??度的Ｄ－半乳糖处理４８ｈ后，一部分使用ＳＡ－?Ｐ?－ｇａｌ染色，每孔选择５个视野，统计染??成深蓝色细胞的比例，结果显示ｌ〇ｇ／Ｌ及２０ｇ／Ｌ时细胞衰老比例明显增加（Ｐ＝０．０００１?），??干预浓度为４０ｇ／Ｌ时，细胞出现明显凋亡和坏死，染成深蓝色比例下降（图１－２?Ｂ）。??ｍ?＿??〇?Ｔ?赫??Ｐ５３?一?一？?晒丨＿?°；?２－??－?￡?国??＞?１＿?一??ｇａｐｄｈ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?１?■?ｉｉ?＾??０）?〇?＿ＥＳ＾ＳＳｌ＿＿?ｒ—Ｉ＿１１１１

别为?Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ?和?４０ｇ／Ｌ，并分别于?２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ?后用?ＣＣＫ－８?检??测细胞生长情况，记录ＯＤ４５０值，每组三个复孔，计算细胞活力。结果发现不同Ｄ－??半乳糖浓度处理的心肌细胞后，随干预时间及浓度的增加细胞活力下降（图１－２?Ａ）。??Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ??８０－｜????ｒｆｆｍｉ??…卜ｉ?ｉ??ｓ—?ｉ＊?ａ?■ｉｌｌ??２〇ｇ／｜＿?４０ｇ／Ｌ?Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ?２０ｇ／Ｌ?４０ｇ／Ｌ??图１－２．?Ｂ．使用ＳＡ－Ｐ－ｇａ丨对经《ｇ，?５ｇ，?Ｉ０ｇ，?２０ｇ，?４０ｇ／Ｌ?Ｄ－半乳糖处理的原代心肌细胞进行染色，??Ｕ－算细胞染成蓝色的比例．＿（Ｆ＝１（丨．５９－?／＂＝〇．（＞〇（＞６：?＞＜０．０５?ｖｓ?Ｕｇ／Ｌ?姐）。??提取的原代心肌细胞种至６孔板，使用Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ浓??度的Ｄ－半乳糖处理４８ｈ后，一部分使用ＳＡ－?Ｐ?－ｇａｌ染色，每孔选择５个视野，统计染??成深蓝色细胞的比例，结果显示ｌ〇ｇ／Ｌ及２０ｇ／Ｌ时细胞衰老比例明显增加（Ｐ＝０．０００１?），??干预浓度为４０ｇ／Ｌ时，细胞出现明显凋亡和坏死，染成深蓝色比例下降（图１－２?Ｂ）。??ｍ?＿??〇?Ｔ?赫??Ｐ５３?一?一？?晒丨＿?°；?２－??－?￡?国??＞?１＿?一??ｇａｐｄｈ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?１?■?ｉｉ?＾??０）?〇?＿ＥＳ＾ＳＳｌ＿＿?ｒ—Ｉ＿１１１１


本文编号：3072133