hAMSCs来源外泌体在促皮肤创面修复中的作用及机制的研究
发布时间：2021-04-22 07:11
目的:创面愈合是由多种细胞和分子参与的高度协调的生理过程。然而,当这一过程中参与的细胞或分子调节出现错误,就会导致创面难愈和瘢痕病理性累积的发生。人羊膜间充质干细胞（Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells,hAMSCs）通过旁分泌的方式在皮肤创面修复、组织再生中发挥重要作用。其中,外泌体是关键的旁分泌介质,它通过转移miRNAs等生物活性分子来诱导再生效应。本研究旨在探讨来源于hAMSCs的外泌体（hAMSC-Exos）对创面愈合的影响及其作用机制。研究方法:1、分离羊膜组织中的hAMSCs并用流式细胞术进行鉴定。2、超离法提取hAMSC-Exos并鉴定。3、体内试验将C57小鼠背部全层皮肤切除并记录创面愈合速度及瘢痕面积大小。4、取愈合后28天C57小鼠表皮组织包埋并进行组织学观察。5、将hAMSC-Exos用PKH-26标记,荧光显微镜下观察能否被靶细胞摄取。6、hAMSC-Exos对HaCaT、Fbs细胞增殖、迁移的影响。7、hAMSC-Exos中促进创面修复的相关miRNAs的筛选及Real-time PCR验证。结果:1、成功分离提取hAM...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 动物和细胞
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器和材料
2.2 实验方法
2.2.1 hAMSCs细胞的分离、培养
2.2.2 流式细胞鉴定hAMSCs表面标记物
2.2.3 hAMSC-Exos的分离提取
2.2.4 Western Blot检测hAMSC-Exos表面标记CD9、CD63、CD81
2.2.5 流式细胞仪鉴定hAMSC-Exos表面标记物
2.2.6 纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）鉴定hAMSC-Exos
2.2.7 电镜鉴定hAMSC-Exos
2.2.8 创建小鼠C57皮肤创面模型
2.2.9 冰冻切片的制备
2.2.10 HE染色
2.2.11 Masson染色
2.2.12 PKH-26 标记的hAMSC-Exos的摄取实验
2.2.13 CCK-8检测细胞增殖
2.2.14 Transwell实验检测细胞迁移
2.2.15 划痕实验检测FBs细胞迁移
2.2.16 hAMSC-Exos中 miRNA和 FBs中 RNA的提取
2.2.17 FBs中创面修复有关基因的mRNA的逆转录
2.2.18 hAMSC-Exos中 miRNAs的逆转录
2.2.19 Real time PCR反应
2.2.20 统计学分析
3 实验结果
3.1 hAMSCs细胞的培养与鉴定
3.2 hAMSC-Exos的分离和鉴定
3.2.1 Western Blot检测hAMSC-Exos表面标记蛋白
3.2.2 流式细胞术检测hAMSC-Exos表面标记物
3.2.3 NTA检测hAMSC-Exos粒径大小
3.2.4 透射电镜鉴定hAMSC-Exos
3.3 hAMSC-Exos促进C57小鼠创面愈合速度
3.4 hAMSC-Exos抑制C57小鼠瘢痕形成
3.5 HE染色显示创面愈合情况
3.6 Masson染色观察胶原排列情况
3.7 PKH-26 标记的hAMSC-Exos的摄取实验
3.8 hAMSC-Exos对 FBs细胞增殖能力无影响
3.9 Transwell实验显示hAMSC-Exos促进HaCaT和 FBs细胞迁移
3.9.1 Transwell实验检测hAMSC-Exos促进HaCaT细胞迁移
3.9.2 Transwell实验显示hAMSC-Exos促进FBs细胞迁移
3.10 划痕实验显示hAMSC-Exos促进FBs细胞迁移
3.11 Real time PCR检测FBs内创面修复相关基因的含量变化
3.12 hAMSC-Exos中 miRNAs的筛选与验证
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
【参考文献】：
博士论文
[1]hAMSCs来源外泌体通过递送miRNAs促进皮肤创面修复的机制研究[D]. 李莹.中国医科大学 2019
本文编号：3153364
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 动物和细胞
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器和材料
2.2 实验方法
2.2.1 hAMSCs细胞的分离、培养
2.2.2 流式细胞鉴定hAMSCs表面标记物
2.2.3 hAMSC-Exos的分离提取
2.2.4 Western Blot检测hAMSC-Exos表面标记CD9、CD63、CD81
2.2.5 流式细胞仪鉴定hAMSC-Exos表面标记物
2.2.6 纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）鉴定hAMSC-Exos
2.2.7 电镜鉴定hAMSC-Exos
2.2.8 创建小鼠C57皮肤创面模型
2.2.9 冰冻切片的制备
2.2.10 HE染色
2.2.11 Masson染色
2.2.12 PKH-26 标记的hAMSC-Exos的摄取实验
2.2.13 CCK-8检测细胞增殖
2.2.14 Transwell实验检测细胞迁移
2.2.15 划痕实验检测FBs细胞迁移
2.2.16 hAMSC-Exos中 miRNA和 FBs中 RNA的提取
2.2.17 FBs中创面修复有关基因的mRNA的逆转录
2.2.18 hAMSC-Exos中 miRNAs的逆转录
2.2.19 Real time PCR反应
2.2.20 统计学分析
3 实验结果
3.1 hAMSCs细胞的培养与鉴定
3.2 hAMSC-Exos的分离和鉴定
3.2.1 Western Blot检测hAMSC-Exos表面标记蛋白
3.2.2 流式细胞术检测hAMSC-Exos表面标记物
3.2.3 NTA检测hAMSC-Exos粒径大小
3.2.4 透射电镜鉴定hAMSC-Exos
3.3 hAMSC-Exos促进C57小鼠创面愈合速度
3.4 hAMSC-Exos抑制C57小鼠瘢痕形成
3.5 HE染色显示创面愈合情况
3.6 Masson染色观察胶原排列情况
3.7 PKH-26 标记的hAMSC-Exos的摄取实验
3.8 hAMSC-Exos对 FBs细胞增殖能力无影响
3.9 Transwell实验显示hAMSC-Exos促进HaCaT和 FBs细胞迁移
3.9.1 Transwell实验检测hAMSC-Exos促进HaCaT细胞迁移
3.9.2 Transwell实验显示hAMSC-Exos促进FBs细胞迁移
3.10 划痕实验显示hAMSC-Exos促进FBs细胞迁移
3.11 Real time PCR检测FBs内创面修复相关基因的含量变化
3.12 hAMSC-Exos中 miRNAs的筛选与验证
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
【参考文献】：
博士论文
[1]hAMSCs来源外泌体通过递送miRNAs促进皮肤创面修复的机制研究[D]. 李莹.中国医科大学 2019
本文编号：3153364
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3153364.html
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