基于EPCs及VEGF165促血管生成作用促进组织工程神经修复大段周围神经缺损
发布时间：2021-06-26 19:18
目的:临床医学对大段周围神经缺损的修复有迫切需求,然而目前构建的神经移植物的血管化问题是困扰大段周围神经缺损修复的重要瓶颈之一。本项目在前期构建组织工程化周围神经的基础上,认为移植物早期血管化对组织工程化周围神经在体内存活起重要作用,提出促血管化组织工程化周围神经促进大段周围神经缺损修复的新方法,即利用携带血管内皮生长因子165基因（VEGF165）的重组腺病毒转染自体内皮祖细胞（EPCs）,并与自体脂肪干细胞（ADSCs）诱导后的类许旺细胞共同作为种子细胞,利用本课题组改良制备的同种异体脱细胞神经支架材料作为载体,构建促血管化组织工程化周围神经,并修复大鼠坐骨神经大段缺损（2cm）,通过大体观察、神经电生理检测、组织学观察等方法评估神经修复情况。探讨基于VEGF165基因及EPCs促血管生成作用构建的神经移植物对动物体内大段神经缺损修复的影响。方法:1、取SD大鼠,无菌分离双侧胫骨及股骨,采用骨髓EPCs分离液分离大鼠EPCs并进行鉴定。采用酶消化法获取大鼠ADSCs,并采用经典诱导方法将其向许旺细胞进行诱导,并进行鉴定。将上述两种细胞按照不同接种比例进行共培养（1:2,1:1及2:...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１?ＥＰＣｓ培养及鉴定
为了观察大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响，我们采用ＣＣＫ－８检测了共培养??组（细胞接种比例为１：１）及对照组类ＳＣｓ于培养ｌｄ、３ｄ、５ｄ及７ｄ的生长情况；??结果（图１．３Ｂ）表明：培养Ｉｄ时两组细胞ＯＤ值比较无明显统计学差异（尸＞０．０５），??而培养３ｄ、５ｄ及７ｄ，共培养Ｉ且细胞ＯＤ值明显襄于对照组（尸＜０．０５），表明大??鼠ＥＰＣｓ能明显促进类ＳＣｓ存活、増殖８??＾?０．８－１?Ｂ?２．５ｎ?＿??＾?ｉ：：ｘ：ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?＊??Ｍ?＊?Ｉ２＇０＇?ｒａｃ〇＇ｃｕｌｔｕｒｅ?＊?｜??Ｍｌ??名?ｌｌｌｌｉｌ?ＭＭ?｜?議?Ｓ?＿?ｆｔ??ｕ?ｎ．?＝?Ｓ?０．５－?ｍ？?ｌ?：：ｉ?ｍ?Ｘ??ｒ．圓國圍?＾〇ｗｊｕｉ－ｉｉ??彳?ｎｎｌ＾ａ?００?ｔ?ｔ?了?Ｔ??２：ｌ?１：１?１：２?Ｔｉｍｅ（ｄ）??图１．３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响（Ａ）不同细胞接种比例下ＥＰＣｓ对类??ＳＣｓ存活的影响；（Ｂ）按１：１接种比例下，ＥＰＣｓ能促进类ＳＣｓ增殖。（＊尸＜０．０５）??１．２．?３．?３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ功能表达的影响及其可能机制分析??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ棊因表达情况见图１．４Ａ。??结果显示，与阴性对照组相比，共培养组及阳性对照组Ｓ－１００及ＧＦＡＰ基囡表达??均升高，其差异均具有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；且与阳性对组组相比，共培养组??上述基固表达亦升窗，其差异具有统计学意义（尸＜０．０５）。??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ蛋白表达情况见图１．４Ｂ。??结果显示
为了观察大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响，我们采用ＣＣＫ－８检测了共培养??组（细胞接种比例为１：１）及对照组类ＳＣｓ于培养ｌｄ、３ｄ、５ｄ及７ｄ的生长情况；??结果（图１．３Ｂ）表明：培养Ｉｄ时两组细胞ＯＤ值比较无明显统计学差异（尸＞０．０５），??而培养３ｄ、５ｄ及７ｄ，共培养Ｉ且细胞ＯＤ值明显襄于对照组（尸＜０．０５），表明大??鼠ＥＰＣｓ能明显促进类ＳＣｓ存活、増殖８??＾?０．８－１?Ｂ?２．５ｎ?＿??＾?ｉ：：ｘ：ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?＊??Ｍ?＊?Ｉ２＇０＇?ｒａｃ〇＇ｃｕｌｔｕｒｅ?＊?｜??Ｍｌ??名?ｌｌｌｌｉｌ?ＭＭ?｜?議?Ｓ?＿?ｆｔ??ｕ?ｎ．?＝?Ｓ?０．５－?ｍ？?ｌ?：：ｉ?ｍ?Ｘ??ｒ．圓國圍?＾〇ｗｊｕｉ－ｉｉ??彳?ｎｎｌ＾ａ?００?ｔ?ｔ?了?Ｔ??２：ｌ?１：１?１：２?Ｔｉｍｅ（ｄ）??图１．３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响（Ａ）不同细胞接种比例下ＥＰＣｓ对类??ＳＣｓ存活的影响；（Ｂ）按１：１接种比例下，ＥＰＣｓ能促进类ＳＣｓ增殖。（＊尸＜０．０５）??１．２．?３．?３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ功能表达的影响及其可能机制分析??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ棊因表达情况见图１．４Ａ。??结果显示，与阴性对照组相比，共培养组及阳性对照组Ｓ－１００及ＧＦＡＰ基囡表达??均升高，其差异均具有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；且与阳性对组组相比，共培养组??上述基固表达亦升窗，其差异具有统计学意义（尸＜０．０５）。??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ蛋白表达情况见图１．４Ｂ。??结果显示
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同微应变环境对组织工程化周围神经移植体性能的影响[J]. 李艳军,孙晓雷,马剑雄,张扬,赵斌,李爽,吕建伟,马信龙. 中华显微外科杂志. 2015 (02)
[2]循环牵张应力对组织工程化周围神经功能恢复的影响[J]. 李艳军,孙晓雷,张扬,赵斌,马剑雄,李风波,马信龙. 中华手外科杂志. 2015 (01)
[3]预血管化组织工程神经修复周围神经缺损的研究[J]. 蒋良福,陈鸥,虞庆,褚庭纲,丁健,李志杰. 中华手外科杂志. 2014 (03)
[4]低渗联合冻干改良制备组织工程神经支架及其性能研究[J]. 赵斌,马信龙,孙晓雷,李秀兰,马剑雄,张扬,杨召,李爽,杨强. 中华创伤骨科杂志. 2014 (03)
[5]PKH-26标记ADSCs示踪技术在构建组织工程周围神经中的应用[J]. 赵斌,马信龙,孙晓雷,李秀兰,杨强,张扬,郭悦. 中华手外科杂志. 2014 (01)
[6]血管化同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损的实验研究[J]. 高宏阳,韩金豹,刘新晖,沙子义,董威,张国平. 河北医科大学学报. 2013 (10)
[7]人工神经桥接体修复神经缺损的研究[J]. 徐伟,肖玉周,代秀松,师佩兰. 南通大学学报(医学版). 2012(05)
[8]人结膜组织匀浆上清液体外诱导BMSCs定向分化的研究[J]. 陈国玲,刘执玉. 中华创伤杂志. 2012 (09)
[9]大鼠脂肪干细胞向雪旺细胞诱导分化能力的研究[J]. 任志午,赵喆,王玉,陈继凤,詹胜锋,刘炎,许文静,张莉,彭江,卢世璧. 中国应用生理学杂志. 2011(04)
[10]人参皂甙Rg1促大鼠坐骨神经再生的初步研究[J]. 周朋,董乐乐,杨占君,方欣. 内蒙古医学杂志. 2011(04)
本文编号：3251926
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１?ＥＰＣｓ培养及鉴定
为了观察大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响，我们采用ＣＣＫ－８检测了共培养??组（细胞接种比例为１：１）及对照组类ＳＣｓ于培养ｌｄ、３ｄ、５ｄ及７ｄ的生长情况；??结果（图１．３Ｂ）表明：培养Ｉｄ时两组细胞ＯＤ值比较无明显统计学差异（尸＞０．０５），??而培养３ｄ、５ｄ及７ｄ，共培养Ｉ且细胞ＯＤ值明显襄于对照组（尸＜０．０５），表明大??鼠ＥＰＣｓ能明显促进类ＳＣｓ存活、増殖８??＾?０．８－１?Ｂ?２．５ｎ?＿??＾?ｉ：：ｘ：ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?＊??Ｍ?＊?Ｉ２＇０＇?ｒａｃ〇＇ｃｕｌｔｕｒｅ?＊?｜??Ｍｌ??名?ｌｌｌｌｉｌ?ＭＭ?｜?議?Ｓ?＿?ｆｔ??ｕ?ｎ．?＝?Ｓ?０．５－?ｍ？?ｌ?：：ｉ?ｍ?Ｘ??ｒ．圓國圍?＾〇ｗｊｕｉ－ｉｉ??彳?ｎｎｌ＾ａ?００?ｔ?ｔ?了?Ｔ??２：ｌ?１：１?１：２?Ｔｉｍｅ（ｄ）??图１．３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ存活的影响（Ａ）不同细胞接种比例下ＥＰＣｓ对类??ＳＣｓ存活的影响；（Ｂ）按１：１接种比例下，ＥＰＣｓ能促进类ＳＣｓ增殖。（＊尸＜０．０５）??１．２．?３．?３大鼠ＥＰＣｓ对类ＳＣｓ功能表达的影响及其可能机制分析??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ棊因表达情况见图１．４Ａ。??结果显示，与阴性对照组相比，共培养组及阳性对照组Ｓ－１００及ＧＦＡＰ基囡表达??均升高，其差异均具有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；且与阳性对组组相比，共培养组??上述基固表达亦升窗，其差异具有统计学意义（尸＜０．０５）。??共培养组、阴性对照组及阳性对照组Ｓ－１００、ＧＦＡＰ蛋白表达情况见图１．４Ｂ。??结果显示
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【参考文献】：
期刊论文
[1]不同微应变环境对组织工程化周围神经移植体性能的影响[J]. 李艳军,孙晓雷,马剑雄,张扬,赵斌,李爽,吕建伟,马信龙. 中华显微外科杂志. 2015 (02)
[2]循环牵张应力对组织工程化周围神经功能恢复的影响[J]. 李艳军,孙晓雷,张扬,赵斌,马剑雄,李风波,马信龙. 中华手外科杂志. 2015 (01)
[3]预血管化组织工程神经修复周围神经缺损的研究[J]. 蒋良福,陈鸥,虞庆,褚庭纲,丁健,李志杰. 中华手外科杂志. 2014 (03)
[4]低渗联合冻干改良制备组织工程神经支架及其性能研究[J]. 赵斌,马信龙,孙晓雷,李秀兰,马剑雄,张扬,杨召,李爽,杨强. 中华创伤骨科杂志. 2014 (03)
[5]PKH-26标记ADSCs示踪技术在构建组织工程周围神经中的应用[J]. 赵斌,马信龙,孙晓雷,李秀兰,杨强,张扬,郭悦. 中华手外科杂志. 2014 (01)
[6]血管化同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损的实验研究[J]. 高宏阳,韩金豹,刘新晖,沙子义,董威,张国平. 河北医科大学学报. 2013 (10)
[7]人工神经桥接体修复神经缺损的研究[J]. 徐伟,肖玉周,代秀松,师佩兰. 南通大学学报(医学版). 2012(05)
[8]人结膜组织匀浆上清液体外诱导BMSCs定向分化的研究[J]. 陈国玲,刘执玉. 中华创伤杂志. 2012 (09)
[9]大鼠脂肪干细胞向雪旺细胞诱导分化能力的研究[J]. 任志午,赵喆,王玉,陈继凤,詹胜锋,刘炎,许文静,张莉,彭江,卢世璧. 中国应用生理学杂志. 2011(04)
[10]人参皂甙Rg1促大鼠坐骨神经再生的初步研究[J]. 周朋,董乐乐,杨占君,方欣. 内蒙古医学杂志. 2011(04)
本文编号：3251926
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