乳铁蛋白对IL-1β诱导人骨关节炎滑膜成纤维细胞MMPs、COX-2、PGE2产生的影响
发布时间：2021-07-03 04:27
目的 探讨乳铁蛋白（LF）对白介素-1β（IL-1β）诱导人骨关节炎（OA）滑膜成纤维细胞中基质金属蛋白酶（MMPs）、环氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）产生的影响。方法 分离并培养人OA滑膜成纤维细胞,取3～4代的细胞进行实验,应用细胞免疫荧光技术来鉴定细胞性质,采用CCK8法检测不同浓度乳铁蛋白对OA滑膜成纤维细胞活性的影响,用实时定量PCR（RT-PCR）和Western blot法检测乳铁蛋白对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞中MMPs和COX-2表达的影响,用ELISA法测量PGE2表达的影响。结果 CCK8结果显示,在一定浓度范围内LF对滑膜成纤维细胞活性无明显影响,差异无统计学意义;RT-PCR、Western blot和ELISA结果提示LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞中MMPs、COX-2、PGE2产生具有抑制作用。结论 LF能够抑制IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞中MMPs、COX-2、PGE2的表达,对OA具有保护作用。
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2019,54(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
滑膜成纤维细胞A:原代细胞×100;B:第三代细胞×1002．2滑膜成纤维细胞的鉴定根据成纤维细胞特
胞核呈蓝色，证明所培养细胞为成纤维细胞，见图2。图2滑膜成纤维细胞免疫荧光鉴定结果A:多聚甲醛固定的普通白光×100;B:DAPI荧光染色×400;C:Vimentin蛋白免疫荧光×400;D:B、C组合图×4002．3CCK8检测LF对FLS活性的影响CCK8结果显示:不同浓度的LF(10、50、100、200、400μg/ml)对FLS活性与空白对照组比较，各组之间均无明显差异(F=0.84，P＞0.05)，见图3。表明在一定浓度范围内LF(0～400μg/ml)不影响FLS的活性。图3LF对FLS活性的影响2．4LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的影响ＲT-PCＲ结果提示，与空白对照组比较，IL-1β诱导组FLS中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表达有显著差异(P＜0.01)，IL-1β诱导组与IL-1β+LF组(200μg/ml)比较显示，LF对IL-1β导致的滑膜成纤维细胞中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。组间比较差异有统计学意义(FMMP1=21.05，FMMP13=317.1，FCOX-2=74.59，P＜0.01，见图4。图4MMP1、MMP13、COX-2mＲNA在FLS中的表达与空白对照组比较:＊＊P＜0.01;与IL-1β诱导组比较:##P＜0.012．5LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMP1、MMP13、COX-2蛋白水平表达的影响用WB技术测定结果提示:IL-1β(10ng/ml)诱导组与空白对照组比较，IL-1β组中MMP1、MMP13、COX-2蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.01)，而IL-1β安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)·1021·
?纤维细胞MMPs、COX-2、PGE2表达的影响应用Westernblot和ＲT-PCＲ法分别测量按上述方法处理的细胞中的MMPs、COX-2蛋白和mＲNA表达水平，用ELISA法测量PGE2表达水平。结果提示:与空白对照组比较，IL-1β诱导组中MMPs、COX-2、PGE2的表达明显差异，差异有统计学意义(P＜0.05);与IL-1β诱导组相比，在一定浓度范围内，LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMPs、COX-2、PGE2的表达呈剂量依赖性，差异有统计学意义(F=3.625，P＜0.05)。见图7。图6PGE2在细胞上清液中表达情况与空白对照组比较:＊＊P＜0.01;IL-1β诱导组比较:##P＜0.013讨论OA是最普遍的关节炎疾病，是导致残疾的主要原因，其主要特征在于关节软骨的组成、结构和功能的显著改变，然而OA病变不只是软骨的病变，还有关节其他组织病变，如滑膜、脂肪垫、软骨下骨以及半月板和韧带等细胞和结构的变化，其中滑膜病·2021·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)
【参考文献】：
期刊论文
[1]基质金属蛋白酶-13的测定在骨关节炎中作用的研究进展[J]. 陈文晓,单方军,金红婷,王萍儿,肖鲁伟,童培建. 中国骨伤. 2014(07)
[2]滑膜成纤维细胞的原代培养及生物特性[J]. 肖楚吟,潘云峰,郭兴华,蔡道章. 中国医学工程. 2010(02)
本文编号：3261866
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2019,54(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
滑膜成纤维细胞A:原代细胞×100;B:第三代细胞×1002．2滑膜成纤维细胞的鉴定根据成纤维细胞特
胞核呈蓝色，证明所培养细胞为成纤维细胞，见图2。图2滑膜成纤维细胞免疫荧光鉴定结果A:多聚甲醛固定的普通白光×100;B:DAPI荧光染色×400;C:Vimentin蛋白免疫荧光×400;D:B、C组合图×4002．3CCK8检测LF对FLS活性的影响CCK8结果显示:不同浓度的LF(10、50、100、200、400μg/ml)对FLS活性与空白对照组比较，各组之间均无明显差异(F=0.84，P＞0.05)，见图3。表明在一定浓度范围内LF(0～400μg/ml)不影响FLS的活性。图3LF对FLS活性的影响2．4LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的影响ＲT-PCＲ结果提示，与空白对照组比较，IL-1β诱导组FLS中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表达有显著差异(P＜0.01)，IL-1β诱导组与IL-1β+LF组(200μg/ml)比较显示，LF对IL-1β导致的滑膜成纤维细胞中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。组间比较差异有统计学意义(FMMP1=21.05，FMMP13=317.1，FCOX-2=74.59，P＜0.01，见图4。图4MMP1、MMP13、COX-2mＲNA在FLS中的表达与空白对照组比较:＊＊P＜0.01;与IL-1β诱导组比较:##P＜0.012．5LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMP1、MMP13、COX-2蛋白水平表达的影响用WB技术测定结果提示:IL-1β(10ng/ml)诱导组与空白对照组比较，IL-1β组中MMP1、MMP13、COX-2蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.01)，而IL-1β安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)·1021·
?纤维细胞MMPs、COX-2、PGE2表达的影响应用Westernblot和ＲT-PCＲ法分别测量按上述方法处理的细胞中的MMPs、COX-2蛋白和mＲNA表达水平，用ELISA法测量PGE2表达水平。结果提示:与空白对照组比较，IL-1β诱导组中MMPs、COX-2、PGE2的表达明显差异，差异有统计学意义(P＜0.05);与IL-1β诱导组相比，在一定浓度范围内，LF对IL-1β诱导人OA滑膜成纤维细胞MMPs、COX-2、PGE2的表达呈剂量依赖性，差异有统计学意义(F=3.625，P＜0.05)。见图7。图6PGE2在细胞上清液中表达情况与空白对照组比较:＊＊P＜0.01;IL-1β诱导组比较:##P＜0.013讨论OA是最普遍的关节炎疾病，是导致残疾的主要原因，其主要特征在于关节软骨的组成、结构和功能的显著改变，然而OA病变不只是软骨的病变，还有关节其他组织病变，如滑膜、脂肪垫、软骨下骨以及半月板和韧带等细胞和结构的变化，其中滑膜病·2021·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)
【参考文献】：
期刊论文
[1]基质金属蛋白酶-13的测定在骨关节炎中作用的研究进展[J]. 陈文晓,单方军,金红婷,王萍儿,肖鲁伟,童培建. 中国骨伤. 2014(07)
[2]滑膜成纤维细胞的原代培养及生物特性[J]. 肖楚吟,潘云峰,郭兴华,蔡道章. 中国医学工程. 2010(02)
本文编号：3261866
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