右美托咪定对肝细胞胰岛素抵抗的影响及机制探讨

发布时间：2021-07-20 16:15

　　研究目的胰岛素抵抗是围术期常见的一种并发症,临床研究表明右美托咪定可以稳定围术期血糖并降低胰岛素抵抗的发生率,然而其分子机制尚未完全明确。内质网应激是胰岛素抵抗发生的重要机制之一,因此,本实验将研究右美托咪定对肝细胞胰岛素抵抗的影响,并探讨该影响是否通过降低内质网应激而实现。研究方法本实验选用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞和LO2细胞建立肝细胞胰岛素抵抗模型。HepG2细胞和LO2细胞分别用含不同浓度胰岛素的培养液培养不同时间,应用CCK8及葡萄糖浓度测定试剂盒选定制备模型的最佳胰岛素浓度及作用时间,即既不抑制细胞活性,又可以产生最大胰岛素抵抗效应。已成功诱导胰岛素抵抗的肝细胞用含不同浓度右美托咪定的培养液培养24小时,用葡萄糖检测试剂盒检测上清中的葡萄糖浓度,观察右美托咪定对胰岛素抵抗的影响。我们在m RNA水平和蛋白水平检测内质网应激相关蛋白结合免疫球蛋白（binding immunoglobulin protein,BIP）及内质网应激蛋白29（endoplasmic reticulum protein 29,ERp29）,此外,用蛋白免疫印迹的方法检测胰岛素作用通路中的重要蛋白... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1含不同终浓度胰岛素的培养液对HepG2细胞活性及葡萄糖消耗量的影响（mean±SD,n=5，*P<0.05）（a.培养24h后的活性检测；b.培养48h后的活性

浙江大学硕士学位论文正文实验结果19图3.1.1含不同终浓度胰岛素的培养液对HepG2细胞活性及葡萄糖消耗量的影响（mean±SD,n=5，*P<0.05）（a.培养24h后的活性检测；b.培养48h后的活性检测；c.培养72h后的活性检测；d.培养24h后的葡萄糖消耗量检测；e.培养48h后的葡萄糖消耗量检测；f.培养72h后的葡萄糖消耗量检测。与空白组相比，20μg/ml组培养24h细胞活性出现显著性降低，*P<0.05；与同组内葡萄糖消耗量最高组相比，10μg/ml组培养48h葡萄糖消耗量出现显著性降低，*P<0.05）图3.1.2含不同终浓度胰岛素的培养液对LO2细胞活性及葡萄糖消耗量的影响

浙江大学硕士学位论文正文实验结果22图3.4.1右美托咪定对内质网应激蛋白的影响（mean±SD,n=3，#P<0.05，*P<0.05）（a和c.HepG2细胞内质网应激蛋白的表达；e.HepG2细胞内质网应激蛋白mRNA水平的表达；b和d.LO2细胞内质网应激蛋白的表达；f.LO2细胞内质网应激蛋白mRNA水平的表达。与N组相比，IR组的BIP和ERp29的蛋白及mRNA水平均显著性升高，#P<0.05；与IR组相比，DEX各组的BIP和ERp29的蛋白及mRNA水平均显著性降低，*P<0.05）3.5右美托咪定对肝细胞胰岛素作用通路蛋白的影响既往研究证实，内质网应激会影响胰岛素作用通路IRS-1/PI3K/Akt相关蛋白的表达，最终影响胰岛素抵抗的发生，因此我们选择了该信号通路的下游蛋白Akt作为研究对象。肝细胞在用高浓度胰岛素处理发生胰岛素抵抗后，Akt在Ser473位点的磷酸化较正常组显著性降低（P<0.05，图3.5.1），该位点的磷酸化水平影响着后续信号通路的表达，这也进一步验证了我们的细胞模型是成功的。而右美

【参考文献】：
期刊论文
[1]右美托咪定对围手术期血糖水平的调控作用[J]. 周炜,田顺平,张转,孙建宏.  国际麻醉学与复苏杂志. 2019 (07)
[2]早期活动对危重症机械通气患者血糖控制和ICU获得性衰弱的影响[J]. 钟景良,梁锦堂,林锦锋,姚慧文.  广东医科大学学报. 2019(02)
[3]右美托咪定对糖尿病大鼠体液免疫及补体的影响[J]. 童希忠,陈勇,郎海丽,胡小兰,余树春,胡衍辉,徐国海.  中国老年学杂志. 2017(03)
[4]桑叶提取物对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖摄取的影响及其分子机制[J]. 方飞,罗明俐,苏楠,吴新荣.  药学学报. 2012(11)
[5]桑叶有效部位对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响[J]. 方飞,吴新荣,罗明俐,吕欢.  广东药学院学报. 2011(06)



本文编号：3293158