低温对氧糖剥夺/复糖复氧PC12细胞损伤的保护研究
发布时间：2021-08-16 20:19
[目的]建立PC12细胞体外培养方法及氧糖剥夺/复糖复氧（oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R）损伤模型,研究低温对体外培养的PC12细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤的保护作用及相关机制。[方法]采用PC12细胞株进行细胞培养,细胞传代后,取第二代,生长至第四天的PC12细胞进行实验。采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）,联合无糖DMEM（Dulbecco minimum essential medium杜尔伯科极限必需培养基）的方法建立PC12细胞的OGD/R（oxygen glucose deprivation and reperfusion）损伤模型,通过噻唑蓝（Thiazolyl Blue Tetrazol ium Bromide MTT）染色法和检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的释放量来评价PC1 2细胞受损伤程度。将体外培养的PC12细胞分为6组：正常对照组、氧糖剥夺/复糖复氧常温组、氧糖剥夺/复糖复氧32℃组（OGD/R+32℃）.氧糖剥夺/复糖复氧32℃给药组（OGD/R+32℃+L...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．正常组、ＯＧＤ／Ｒ组细胞形态学变化
３．１２?ＭＴＴ?分析：??０ＧＤ／Ｒ造模组细胞百分活力与正常对照组ＰＣ１２细胞的百分活力相比下降了??７８．８３％，如图３Ａ所示，且两组比较差异有统计学意义，说明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??３．１３?ＬＤＨ释放量的检测Ｓ??０ＧＤ／Ｒ造模组ＰＣ１２细胞的ＬＤＨ百分释放量约为正常对照组２．０倍如图３Ｂ所??示，且两者比较差异有统计学意义，说明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??细胞活力（％）?Ｉ?ＬＤＨ释放量（％）??２５０??１２０?．?２００；?扇??１００?ｊ?Ａ?巧叫?響??８０?Ｔ?麵’??■?，?１?兰匿??０?＇Ｔ????＾???Ｑ?．．．?????正常对照巧?ＯＧＤ／烛?正常对照坦ＯＧＤ／Ｒ组??Ａ?Ｂ??图３．?ＯＧＤ／Ｒ造模后，ＰＣ１２细胞细胞活力的变化。（Ａ）?ＭＴＴ分析；（Ｂ）?ＬＤＨ释??放量的检测。??正常对照组用完全培养基艇育４?ｈ，０ＧＤ／Ｒ造模组用含２?ｍＭ连二亚硫酸钥的无??糖ＤＭＥＭ解育４ｈ，然后换用完全培养基继续在Ｃ０２培养箱（３７?’Ｃ，５?％?Ｃ〇２，?９５??１５??
在倒置显微镜下观察ＰＣ１２细胞的形态学变化，显微镜下观察发现，??对照组未经过氧糖剥夺／复糖复氧处理的细胞贴壁良好，多成楠圆形，细胞形??态饱满，可见突触生长，一些细胞交织成网（图４Ａ）。３７°Ｃ下氧糖剥夺处理４??小时，复糖复氧２４小时后，显微镜下可见细胞胞体皱缩，细胞变形，立体感??消失（图４Ｂ）。低湿处理的０ＧＤ／Ｒ组，细胞形态学上的变化较未经低温处理??的０ＧＤ／Ｒ组的细胞明显减少，可见少量细胞皱缩，胞体变圆，立体感消失。??０抑／Ｒ＋２７°Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?组和?０ＧＤ／Ｒ＋３２‘Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?组细胞胞体皱缩，细胞??胞体变圆，失去光泽，变形，立体感消失。??矜妒等??繞扩３??Ａ．?正常对照组（１００倍）?Ｂ．?０ＧＤ／Ｒ?３７Ｃ组（１００倍）??ＨＢ??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]停循环相关脑损伤的大鼠海马线粒体COX蛋白获取及验证[J]. 高永军,曹毅,袁勇,张喜兵,赵宁辉,徐蔚. 云南大学学报(自然科学版). 2014(05)
[2]全身亚低温治疗对缺氧缺血性脑病新生儿内环境的影响[J]. 陈桃英,王晓蕾,金未来,马娟,郁敏. 中国儿童保健杂志. 2013(07)
[3]PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂在乳腺癌中的研究进展[J]. 廖明娟,陈红风. 中华肿瘤防治杂志. 2012(03)
[4]亚低温对大鼠缺血性脑损伤后JAK1-STAT1通路的作用[J]. 徐玉婷,柳红,赵瑞波. 临床与实验病理学杂志. 2011(03)
[5]丙泊酚预处理对大鼠离体心肌浅低温缺血/再灌注损伤后线粒体细胞色素C释放的影响[J]. 汪昊星,朱珊珊,曾因明. 中国应用生理学杂志. 2009(03)
[6]二氮嗪对长时程低温保存大鼠心脏Fas/FasL蛋白表达的影响[J]. 范莹,郑鸣之,郭炜,蒋建平,朱立,沈岳良,陈莹莹. 生理学报. 2008(01)
[7]亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用[J]. 李冲,胡薇薇,张光毅. 徐州医学院学报. 2007(12)
[8]不同时程电针对大鼠MCAO再灌注区梗塞面积及病理形态的影响[J]. 张天生,杨慎峭,乔秀兰,吴巧凤,张新星,刘旭光. 中华中医药学刊. 2007(08)
[9]亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤p-ERK/p38 MAPK的影响[J]. 王来栓,邵肖梅,杨毅,陈莲. 中华围产医学杂志. 2006(05)
[10]亚低温治疗重型颅脑损伤前瞻性临床多中心对照研究[J]. 江基尧,方乃成,张建平,李维平,徐蔚,朱诚,许文辉,包映辉,王勇,邱永明,罗其中. 上海第二医科大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]颈部降温通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻心肺复苏后兔脑损伤及抑制凋亡的机制研究[D]. 张浙.第二军医大学 2014
[2]通过调节JAK2-STAT3和Wnt5a信号通路可能是缺血后处理及低温减轻全脑缺血性脑损伤的分子机制[D]. 陈强.福建医科大学 2012
[3]上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin1的表达及其调控相关信号途径PI3K/PKB的实验研究[D]. 段振玲.四川大学 2007
硕士论文
[1]芎芍胶囊对动脉粥样硬化兔血脂及炎症因子的影响[D]. 盛松.北京中医药大学 2013
本文编号：3346324
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．正常组、ＯＧＤ／Ｒ组细胞形态学变化
３．１２?ＭＴＴ?分析：??０ＧＤ／Ｒ造模组细胞百分活力与正常对照组ＰＣ１２细胞的百分活力相比下降了??７８．８３％，如图３Ａ所示，且两组比较差异有统计学意义，说明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??３．１３?ＬＤＨ释放量的检测Ｓ??０ＧＤ／Ｒ造模组ＰＣ１２细胞的ＬＤＨ百分释放量约为正常对照组２．０倍如图３Ｂ所??示，且两者比较差异有统计学意义，说明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??细胞活力（％）?Ｉ?ＬＤＨ释放量（％）??２５０??１２０?．?２００；?扇??１００?ｊ?Ａ?巧叫?響??８０?Ｔ?麵’??■?，?１?兰匿??０?＇Ｔ????＾???Ｑ?．．．?????正常对照巧?ＯＧＤ／烛?正常对照坦ＯＧＤ／Ｒ组??Ａ?Ｂ??图３．?ＯＧＤ／Ｒ造模后，ＰＣ１２细胞细胞活力的变化。（Ａ）?ＭＴＴ分析；（Ｂ）?ＬＤＨ释??放量的检测。??正常对照组用完全培养基艇育４?ｈ，０ＧＤ／Ｒ造模组用含２?ｍＭ连二亚硫酸钥的无??糖ＤＭＥＭ解育４ｈ，然后换用完全培养基继续在Ｃ０２培养箱（３７?’Ｃ，５?％?Ｃ〇２，?９５??１５??
在倒置显微镜下观察ＰＣ１２细胞的形态学变化，显微镜下观察发现，??对照组未经过氧糖剥夺／复糖复氧处理的细胞贴壁良好，多成楠圆形，细胞形??态饱满，可见突触生长，一些细胞交织成网（图４Ａ）。３７°Ｃ下氧糖剥夺处理４??小时，复糖复氧２４小时后，显微镜下可见细胞胞体皱缩，细胞变形，立体感??消失（图４Ｂ）。低湿处理的０ＧＤ／Ｒ组，细胞形态学上的变化较未经低温处理??的０ＧＤ／Ｒ组的细胞明显减少，可见少量细胞皱缩，胞体变圆，立体感消失。??０抑／Ｒ＋２７°Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?组和?０ＧＤ／Ｒ＋３２‘Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?组细胞胞体皱缩，细胞??胞体变圆，失去光泽，变形，立体感消失。??矜妒等??繞扩３??Ａ．?正常对照组（１００倍）?Ｂ．?０ＧＤ／Ｒ?３７Ｃ组（１００倍）??ＨＢ??２４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]停循环相关脑损伤的大鼠海马线粒体COX蛋白获取及验证[J]. 高永军,曹毅,袁勇,张喜兵,赵宁辉,徐蔚. 云南大学学报(自然科学版). 2014(05)
[2]全身亚低温治疗对缺氧缺血性脑病新生儿内环境的影响[J]. 陈桃英,王晓蕾,金未来,马娟,郁敏. 中国儿童保健杂志. 2013(07)
[3]PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂在乳腺癌中的研究进展[J]. 廖明娟,陈红风. 中华肿瘤防治杂志. 2012(03)
[4]亚低温对大鼠缺血性脑损伤后JAK1-STAT1通路的作用[J]. 徐玉婷,柳红,赵瑞波. 临床与实验病理学杂志. 2011(03)
[5]丙泊酚预处理对大鼠离体心肌浅低温缺血/再灌注损伤后线粒体细胞色素C释放的影响[J]. 汪昊星,朱珊珊,曾因明. 中国应用生理学杂志. 2009(03)
[6]二氮嗪对长时程低温保存大鼠心脏Fas/FasL蛋白表达的影响[J]. 范莹,郑鸣之,郭炜,蒋建平,朱立,沈岳良,陈莹莹. 生理学报. 2008(01)
[7]亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用[J]. 李冲,胡薇薇,张光毅. 徐州医学院学报. 2007(12)
[8]不同时程电针对大鼠MCAO再灌注区梗塞面积及病理形态的影响[J]. 张天生,杨慎峭,乔秀兰,吴巧凤,张新星,刘旭光. 中华中医药学刊. 2007(08)
[9]亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤p-ERK/p38 MAPK的影响[J]. 王来栓,邵肖梅,杨毅,陈莲. 中华围产医学杂志. 2006(05)
[10]亚低温治疗重型颅脑损伤前瞻性临床多中心对照研究[J]. 江基尧,方乃成,张建平,李维平,徐蔚,朱诚,许文辉,包映辉,王勇,邱永明,罗其中. 上海第二医科大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]颈部降温通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路减轻心肺复苏后兔脑损伤及抑制凋亡的机制研究[D]. 张浙.第二军医大学 2014
[2]通过调节JAK2-STAT3和Wnt5a信号通路可能是缺血后处理及低温减轻全脑缺血性脑损伤的分子机制[D]. 陈强.福建医科大学 2012
[3]上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin1的表达及其调控相关信号途径PI3K/PKB的实验研究[D]. 段振玲.四川大学 2007
硕士论文
[1]芎芍胶囊对动脉粥样硬化兔血脂及炎症因子的影响[D]. 盛松.北京中医药大学 2013
本文编号：3346324
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