脂肪源性干细胞向甲状旁腺样细胞分化的实验研究

发布时间：2021-09-12 20:29

　　目的:甲状腺切除术后甲状旁腺功能减退症是一种常见的,灾难性的,医源性损伤,发生率较高。目前现有的药物替代疗法效果不尽如人意。探索建立脂肪源性干细胞（ADSCs）分化成甲状旁腺样细胞的方法,从而找到可供甲状旁腺自体移植充足的种子细胞,为临床彻底治愈甲旁减开辟一条新途径。方法:切取SD大鼠腹股沟区脂肪,采用酶消化法和细胞贴壁分离的方法,分离、培养和纯化出ADSCs,行成脂诱导和成骨诱导,进行细胞鉴定。取第五代的ADSCs,分为对照组和Shh（100ng/ml）和三种不同浓度的Activin A（25ng/mL,50ng/mL,75ng/mL）作用组。在诱导的7d、14d、21d应用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测甲状旁腺素（PTH）的含量,蛋白免疫印迹（Western blot）检测细胞中CaSR、PTH和Gcm2的蛋白表达量,PCR检测分化细胞中CaSR、PTH和Gcm2的mRNA表达量。结果:成脂诱导和成骨诱导分化成功,证明为ADSCs。ADSCs在Shh和Activin A的作用下,培养液中检测出PTH,并存在诱导浓度和时间依赖性。以Shh 100ng/ml和Activin A... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

ADSCs成脂诱导后脂滴形成

中国医科大学博士学位论文14实验一结果1鉴定大鼠ADSCs成脂诱导将已经配制好的成脂诱导液加入到ADSCs内，反应7d（图1A）、14d（图1B）、21d（图1C）后，利用油红O对反应后的ADSCs进行染色，然后将其倒置于显微镜下，利用显微镜对脂滴形成的过程进行观察。我们发现，在整个观察过程中，细胞中脂滴数量不断增长，该结果表明细胞成脂诱导成功。图1ADSCs成脂诱导后脂滴形成2大鼠ADSCs成骨诱导的鉴定ADSCs加入成骨诱导液分别诱导7d（图2A）、14d（图2B）、21d（图2C）后，将反应后的ADSCs利用茜素红进行染色，然后将其倒置于显微镜下，通过显微镜对细胞中钙的沉积过程观察，发现整个观察过程中钙盐沉积越来越多，表明细胞成骨诱导成功。图2ADSCs成骨诱导后钙盐沉积形成

中国医科大学博士学位论文21实验二结果1ADSCs向甲状旁腺样细胞分化形态学的变化随着诱导剂浓度的增加和作用时间的延长，细胞数量明显增加，细胞呈长梭型，形态均已，呈鱼群样排列，方向性明显（图1-1，图1-2，图1-3）图1-1不同浓度Shh和ActivinA处理ADSCs7d后细胞形态变化

【参考文献】：
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本文编号：3394895