P62蛋白与骨巨细胞瘤细胞增殖的相关研究

发布时间：2021-11-06 13:48

　　[目的]检测骨巨细胞瘤中P62、RANK、RANKL基因及蛋白的表达水平并分析相关性,明确P62蛋白表达对骨巨细胞瘤细胞增殖能力的影响,为骨巨细胞瘤的临床治疗寻找新的靶点。[方法]1、采用基因测序检测13例骨巨细胞瘤新鲜组织中P62基因在Exons 7和Exons 8之间点突变情况,采用qRT-PCR及Western blot检测8例骨巨细胞瘤新鲜组织和瘤旁组织中P62、RANK、RANKL mRNA和蛋白的表达情况,并分析三者相关性。2.留取骨巨细胞瘤新鲜组织,进行细胞分离,培养单核基质细胞,使用慢病毒质粒转染上调或下调P62基因表达,通过CCK8试剂盒、流式细胞术检测,观察P62基因的表达对单核基质细胞的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响。[结果]1、基因测序结果显示,P62基因在Exons 7和Exons 8之间的1340bp位置有G1340A突变,但是在415位置的氨基酸R（精氨酸）未发生突变;qRT-PCR结果显示骨巨细胞瘤组织中 P62mRNA（P=0.0459）、RANK mRNA（P=0.0007）、RANKLmRNA（P=0.0001）的表达水平显著高于瘤旁组织,且R... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２Ａ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ检测Ｐ６２ｍＲＮＡ在ＧＣＴＢ组织中较瘤旁组织的表达升高；Ｂ：?ＲＡＮＫ??ｍＲＮＡ达ＧＣＴＢ组组织；Ｃ：?ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ的表达在ＧＣＴＢ组织??

：－ｍＲＮＡ的表达在ＧＣＴＢ组织较瘤旁组织升高；Ｃ：?ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ的表达在ＧＣＴＢ组织??较瘤旁组织升高；＊：?Ｐ＜〇．〇５；?＊＊：Ｐ＜０．０１；?＊＊＊：Ｐ＜０．００１；??２．２?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ?相关性分析??我们将ｑＲＴ－ＰＣＲ检测结果采用Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析，结果显示ＲＡＮＫＬ与??ＲＡＮＫ?相关系数（Ｒ２＝０．５４３５，Ｐ＜０．０００１）?，?Ｐ６２?和?ＲＡＮＫＬ?相关系数（Ｒ２＝０．３５０５，??Ｐ＜０．０００１），Ｐ６２?和?ＲＡＮＫ?相关系数（Ｒ２＝０．３３２５，?Ｐ＜０．０００１），提示?Ｐ６２ｍＲＮＡ、??ＲＡＮＫ?ｍＲＮＡ及ＲＡＮＫＬ?ｍＲＮＡ三者两两之间呈正相关，如图３：??图２：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ三者相关性分析??

一?只通?ｔ?‘?？?？?＿?———“？？＃？?？??ｐ－Ａｃｔｉｎ?ｍｍ?—?＾－Ａｃｔ，ｎ?—＞?一?ｐ．Ａｃｔｉｎ??Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?ＴＪ?Ｎ３?Ｔ４?Ｎ４?Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?Ｔ３?Ｎ３?Ｔ４?Ｎ４?Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?Ｔｔ?ＮＳ?Ｔ４?Ｎ４??ｐ－Ａ＜ｔ，＾?—?＾?＾?＾?（ｊ－Ａｃｔｉｎ?＿??Ｔ５?ＮＳ?ＴＶ?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ７?Ｔ８?Ｎ８?Ｔ５?Ｎ５?Ｔｆ?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ？?Ｔ８?Ｎｔ?ＴＳ?ＮＳ?Ｔ（?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ７?Ｔ８?Ｎ８??图４?Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｐ６２蛋白在ＧＣＴＢ组织中高表达，灰度分析显示Ｐ６２蛋白在ＧＣＴＢ??组织中较瘤旁组织表达升高；Ｂ：?ＲＡＮＫ蛋白在ＧＣＴＢ组织中较瘤旁组织表达升高；Ｃ：??ＲＡＮＫＬ蛋白在ＧＣＴＢ组织中较瘤旁组织表达升高；Ｄ、Ｅ、Ｆ：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ??蛋白在ＧＣＴＢ组织中呈高表达表达情况；＊：?Ｐ＜０．０５；?＊＊：Ｐ＜０．０１；?＊＊＊：Ｐ＜０．００１；??２．４?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ蛋白相关性分析??我们将蛋白质印迹检测结果采用Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析，结果显示ＲＡＮＫＬ与??ＲＡＮＫ?相关系数（Ｒ２＝０．５２０７，Ｐ＝０．００１６）?，?Ｐ６２?和?ＲＡＮＫＬ?相关系数（Ｒ２＝０．３４７６，??Ｐ＝０．０１６２），Ｐ６２?和?ＲＡＮＫ?相关系数（Ｒ２＝０．４５７１，Ｐ＝０．００４），提示?Ｐ６２?蛋白、??ＲＡＮＫ蛋白及ＲＡＮＫＬ蛋白三者两两之间呈正相关，如图５：??图４：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ蛋白三者相关性分析??Ａ?，．５ｌ?Ｂ?１５?Ｃ?２．０－，?？??■?參??


本文编号：3479946