下调miR-155对TBI小鼠肠黏膜屏障功能的影响
发布时间：2021-11-17 02:35
目的:本研究探讨miR-155在小鼠创伤性脑损伤后肠黏膜屏障损伤中的作用机制。通过动物实验下调miR-155表达对上皮间紧密连接蛋白claudin-1表达的调控对肠黏膜屏障功能的影响。探索干预miR-155/claudin-1的手段,研究其对创伤动物模型中肠黏膜屏障功能的影响,并探讨其用于治疗肠黏膜屏障功能障碍的有效性和可行性。方法:脑损伤小鼠模型使用改良后的Feeney自由落体脑损伤装置建立。选取24只健康雄性小鼠随机分成4组:A组正常对照组（Sham组）、B组脑外伤小鼠模型组（TBI组）、C组脑外伤小鼠模型miR-155-shRNA干扰组（Anti组）、D组脑外伤小鼠模型阴性控制组（NC组）,并制备含有miR-155的病毒载体,分别对C组、D组脑损伤处注射相关病毒,来模拟miR-155下调。收集小鼠小肠组织标本后,RT-qPCR检测小鼠肠组织miR-155的相对表达量、小鼠肠黏膜组织HE染色观察肠黏膜组织的镜下特点、免疫组化染色等观察小鼠肠黏膜claudin-1的阳性颗粒表达情况,评估肠黏膜屏障功能状态。结果:各组于造模后第5d处死小鼠取小肠组织,RT-qPCR结果显示与Sham组...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
辅助质粒图谱
新疆医科大学硕士学位论文12相应的病毒转染后再次消毒，缝合头皮，预防感染的抗生素为：青霉素8万单位/只腹腔注射，随后置于电热炉旁观察1h，待麻醉苏醒后将小鼠按实验分组归笼，放回清洁鼠笼内继续观察。作为正常对照组，Sham组小鼠麻醉后仅用颅骨钻钻孔但不进行自由落体装置撞击。每次撞击前均需先消毒撞击针头以避免交叉感染。ab图2自由落体脑损伤装置（a）和打击小鼠的骨窗位置（b）Figure2Free-fallingbraininjurydevice(a)andthelocationofthebonewindowinthestrikingmice(b)2.2.3收集标本各组的小鼠在造模5d后通过摘除眼球采血并用颈椎脱臼法处死小鼠。剖开小鼠腹腔小心摘除小肠，注意勿使肠系膜组织残留。将小肠放入冰盐水中，用小鼠灌胃针插入小肠近端，通过灌胃针用注射器反复地注入冰盐水，直至远端小肠再无粪便流出。将小肠近、远段小肠各5cm剪去，将修剪好的肠段分为4份，1份置入4%的多聚甲醛固定（至少24h），浸泡后行组织形态学检查，其余3份置入RNA保存液Trizol中保存并放置于-80℃冰箱以备后续PCR检测。以腺相关病毒（AAV）为载体构建小鼠miR-155-5p抑制剂，将其转染给小鼠，PCR检测小肠组织中miR-155的表达水平并观察术后第5d的肠黏膜病理改变。2.2.4PCR检测小肠组织中miR-155水平聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）的实验原理为与荧光指示染料在单管PCR的扩增和测定步骤结合使用，测定相关目的基因的含量。其含量的测定结果依赖于测定增加的荧光信号，荧光信号强度与每一次PCR循环的产物量成正比。此外，在单次反应中，用不同染料标记的探针能够监测和定量多标记的目的基因。荧光阈值：在荧光扩增曲线指数增长期设定一个荧光强度标准（即PCR扩增产物量标准）。荧光阈值可设
新疆医科大学硕士学位论文23结果1TBI小鼠建模、术后行为学表现及各组小鼠术后5d生存曲线1.1TBI小鼠建模参照Feeney自由落体模型建立脑损伤小鼠模型，通过调节撞击锤的质量和下落的高度来复制不同程度的创伤性脑损伤模型。小鼠脑损伤严重程度与打击力度相关，本实验撞击小鼠左侧大脑半球，其撞击深度小于1.5mm为限模拟中度颅脑损伤。Sham组小鼠及TBI组小鼠处死后脑组织的大体标本如图3所示。ab图3Sham组（a）和TBI组（b）脑组织的大体标本Figure3GrossspecimensofbraintissuefromTBIgroup(a)andShamgroup(b)1.2小鼠昏迷及神经反射抑制时间包括正常对照组在内的所有实验小鼠建模后均呈昏迷状态，小鼠意识和神经反射抑制时间存在个体差异，总体来看，建模后小鼠昏迷时间越长，表明颅脑损伤越重，各组小鼠昏迷及神经反射抑制时间如表13所示，其中Sham组小鼠的昏迷时间、疼痛时间、翻正反射恢复时间均小于TBI组、Anti组、NC组（P＜0.05），小鼠全身状况良好，生命体征平稳。而TBI组、Anti组、NC组小鼠的昏迷时间、疼痛时间、翻正反射恢复时间无统计学差异（P＞0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]右美托咪啶联合低温对创伤性脑损伤小鼠急性脑水肿的影响[J]. 梁佳敏,张谦,侯亚红,杨程,程世翔. 中华创伤杂志. 2019 (05)
[2]丁苯酞在脑损伤后炎性反应中的神经保护机制[J]. 刘政委,李立文,王汉东,石小峰,孔文龙. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[3]诱导型神经干细胞移植对颅脑创伤后神经营养因子分泌的影响[J]. 高谋,徐如祥,王文佳,董勤,丁柏匀,姚慧,杨志军. 中华脑科疾病与康复杂志(电子版). 2019(02)
[4]生命早期抗生素干预对小鼠肠道菌群及脑部功能基因表达的影响[J]. 张瑜杰,蒲芳芳,程如越,郭佳汶,王世杰,蒋与刚,李鸣,何方. 中国抗生素杂志. 2019(08)
[5]双脑模型假说—由肠道菌群微生态构建的“菌脑”可能是人体对物质记忆的“第二大脑”[J]. 张成岗,巩文静,李志慧,高大文,高艳. 实用临床医药杂志. 2019(06)
[6]肠道黏膜屏障功能评估的研究进展[J]. 高鹏,张旭光,刘雪来. 发育医学电子杂志. 2019(01)
[7]益生菌治疗结肠炎大鼠前后肠道菌群变化及毒力因子检测分析[J]. 张孟爽,郑晓者,牛敏,刘淑敏,段勇,杜娜,尧静,杜艳. 中国抗生素杂志. 2018(10)
[8]颅脑外伤患者血清CNP、IGF-Ⅱ含量与脑损伤、炎症反应的相关性研究[J]. 赵欣,廉民学,贺慧兰,吴媛媛,鲍刚. 海南医学院学报. 2018(06)
[9]肠黏膜屏障功能障碍与细菌易位研究进展[J]. 葛耀植,黄红兰. 医学综述. 2018(06)
[10]Effect of toll-like receptor 3 agonist poly I:C on intestinal mucosa and epithelial barrier function in mouse models of acute colitis[J]. Hong-Wei Zhao,Yue-Hong Yue,Hua Han,Xiu-Li Chen,Yong-Gang Lu,Ji-Min Zheng,Hong-Tao Hou,Xiao-Meng Lang,Li-Li He,Qi-Lu Hu,Zi-Qian Dun. World Journal of Gastroenterology. 2017(06)
博士论文
[1]控制性低血压与血液稀释对犬胃肠灌注及氧合影响的实验研究[D]. 李秋霞.中国协和医科大学 2002
硕士论文
[1]颅脑损伤患儿血浆内毒素变化及其临床意义探讨[D]. 崔甜甜.中国医科大学 2019
本文编号：3500049
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【学位级别】：硕士
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新疆医科大学硕士学位论文12相应的病毒转染后再次消毒，缝合头皮，预防感染的抗生素为：青霉素8万单位/只腹腔注射，随后置于电热炉旁观察1h，待麻醉苏醒后将小鼠按实验分组归笼，放回清洁鼠笼内继续观察。作为正常对照组，Sham组小鼠麻醉后仅用颅骨钻钻孔但不进行自由落体装置撞击。每次撞击前均需先消毒撞击针头以避免交叉感染。ab图2自由落体脑损伤装置（a）和打击小鼠的骨窗位置（b）Figure2Free-fallingbraininjurydevice(a)andthelocationofthebonewindowinthestrikingmice(b)2.2.3收集标本各组的小鼠在造模5d后通过摘除眼球采血并用颈椎脱臼法处死小鼠。剖开小鼠腹腔小心摘除小肠，注意勿使肠系膜组织残留。将小肠放入冰盐水中，用小鼠灌胃针插入小肠近端，通过灌胃针用注射器反复地注入冰盐水，直至远端小肠再无粪便流出。将小肠近、远段小肠各5cm剪去，将修剪好的肠段分为4份，1份置入4%的多聚甲醛固定（至少24h），浸泡后行组织形态学检查，其余3份置入RNA保存液Trizol中保存并放置于-80℃冰箱以备后续PCR检测。以腺相关病毒（AAV）为载体构建小鼠miR-155-5p抑制剂，将其转染给小鼠，PCR检测小肠组织中miR-155的表达水平并观察术后第5d的肠黏膜病理改变。2.2.4PCR检测小肠组织中miR-155水平聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）的实验原理为与荧光指示染料在单管PCR的扩增和测定步骤结合使用，测定相关目的基因的含量。其含量的测定结果依赖于测定增加的荧光信号，荧光信号强度与每一次PCR循环的产物量成正比。此外，在单次反应中，用不同染料标记的探针能够监测和定量多标记的目的基因。荧光阈值：在荧光扩增曲线指数增长期设定一个荧光强度标准（即PCR扩增产物量标准）。荧光阈值可设
新疆医科大学硕士学位论文23结果1TBI小鼠建模、术后行为学表现及各组小鼠术后5d生存曲线1.1TBI小鼠建模参照Feeney自由落体模型建立脑损伤小鼠模型，通过调节撞击锤的质量和下落的高度来复制不同程度的创伤性脑损伤模型。小鼠脑损伤严重程度与打击力度相关，本实验撞击小鼠左侧大脑半球，其撞击深度小于1.5mm为限模拟中度颅脑损伤。Sham组小鼠及TBI组小鼠处死后脑组织的大体标本如图3所示。ab图3Sham组（a）和TBI组（b）脑组织的大体标本Figure3GrossspecimensofbraintissuefromTBIgroup(a)andShamgroup(b)1.2小鼠昏迷及神经反射抑制时间包括正常对照组在内的所有实验小鼠建模后均呈昏迷状态，小鼠意识和神经反射抑制时间存在个体差异，总体来看，建模后小鼠昏迷时间越长，表明颅脑损伤越重，各组小鼠昏迷及神经反射抑制时间如表13所示，其中Sham组小鼠的昏迷时间、疼痛时间、翻正反射恢复时间均小于TBI组、Anti组、NC组（P＜0.05），小鼠全身状况良好，生命体征平稳。而TBI组、Anti组、NC组小鼠的昏迷时间、疼痛时间、翻正反射恢复时间无统计学差异（P＞0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]右美托咪啶联合低温对创伤性脑损伤小鼠急性脑水肿的影响[J]. 梁佳敏,张谦,侯亚红,杨程,程世翔. 中华创伤杂志. 2019 (05)
[2]丁苯酞在脑损伤后炎性反应中的神经保护机制[J]. 刘政委,李立文,王汉东,石小峰,孔文龙. 中华实验外科杂志. 2019 (05)
[3]诱导型神经干细胞移植对颅脑创伤后神经营养因子分泌的影响[J]. 高谋,徐如祥,王文佳,董勤,丁柏匀,姚慧,杨志军. 中华脑科疾病与康复杂志(电子版). 2019(02)
[4]生命早期抗生素干预对小鼠肠道菌群及脑部功能基因表达的影响[J]. 张瑜杰,蒲芳芳,程如越,郭佳汶,王世杰,蒋与刚,李鸣,何方. 中国抗生素杂志. 2019(08)
[5]双脑模型假说—由肠道菌群微生态构建的“菌脑”可能是人体对物质记忆的“第二大脑”[J]. 张成岗,巩文静,李志慧,高大文,高艳. 实用临床医药杂志. 2019(06)
[6]肠道黏膜屏障功能评估的研究进展[J]. 高鹏,张旭光,刘雪来. 发育医学电子杂志. 2019(01)
[7]益生菌治疗结肠炎大鼠前后肠道菌群变化及毒力因子检测分析[J]. 张孟爽,郑晓者,牛敏,刘淑敏,段勇,杜娜,尧静,杜艳. 中国抗生素杂志. 2018(10)
[8]颅脑外伤患者血清CNP、IGF-Ⅱ含量与脑损伤、炎症反应的相关性研究[J]. 赵欣,廉民学,贺慧兰,吴媛媛,鲍刚. 海南医学院学报. 2018(06)
[9]肠黏膜屏障功能障碍与细菌易位研究进展[J]. 葛耀植,黄红兰. 医学综述. 2018(06)
[10]Effect of toll-like receptor 3 agonist poly I:C on intestinal mucosa and epithelial barrier function in mouse models of acute colitis[J]. Hong-Wei Zhao,Yue-Hong Yue,Hua Han,Xiu-Li Chen,Yong-Gang Lu,Ji-Min Zheng,Hong-Tao Hou,Xiao-Meng Lang,Li-Li He,Qi-Lu Hu,Zi-Qian Dun. World Journal of Gastroenterology. 2017(06)
博士论文
[1]控制性低血压与血液稀释对犬胃肠灌注及氧合影响的实验研究[D]. 李秋霞.中国协和医科大学 2002
硕士论文
[1]颅脑损伤患儿血浆内毒素变化及其临床意义探讨[D]. 崔甜甜.中国医科大学 2019
本文编号：3500049
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