雷帕霉素-mTOR途径诱导的自噬抑制软骨细胞凋亡的作用研究

发布时间：2021-11-17 06:34

　　背景及目的:骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种与关节软骨细胞凋亡和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）降解相关的慢性疼痛致残性疾病。近年发现,软骨细胞自噬的缺失在OA进展中起关键作用。自噬是细胞在应激条件下降解细胞内成分循环利用,维持必需的细胞功能的适应性反应。雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）是一种新型大环内酯类免疫抑制剂,可以抑制mTOR信号通路的mTORC1,从而激活自噬。已有研究表明自噬对OA软骨细胞有保护作用。目前研究自噬对软骨细胞凋亡的影响鲜有报道。本研究应用体外培养软骨细胞方法,探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）诱导软骨细胞凋亡的可能损伤机制,并通过RAPA激活软骨细胞自噬,研究自噬在DEX诱导软骨细胞凋亡中的影响,以期为OA的预防和治疗提供新依据。方法:从5位股骨颈骨折需行髋关节置换术患者和7位实施全膝关节置换术晚期OA患者的关节软骨中分别分离培养获得正常和OA软骨细胞。将成功培养的第二代软骨细胞分为以下6组,正常软骨细胞加BSA至终浓度为100ug/ml培养12h;正常软骨DEX组细胞加DEX-BSA至... 

【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

自噬的信号转导途径及发生过程

22内蒙古医科大学硕士研究生学位论文（2019）标准差( +SD)描述，计量资料两组间比较用独立样本 t 检验，以 P＜0.05 表明两组间有统计学差异。3 结果3.1 软骨细胞的分离培养及鉴定3.1.1 分离培养实验中经二步酶消化法分离获得原代软骨细胞，呈球形悬浮状，折光性较强，大小较一致。大多数约 14 天左右爬满瓶底，最初细胞每 5-8 个成群分布，爬满瓶底时细胞胞体丰满，胞质均匀。在培养 3、7、10、13 天后细胞形态见图 2。软骨细胞经传代后贴壁时间较原代软骨细胞短，增殖速率加快，约 7-8 天大部分呈椭圆形，部分呈梭形铺满培养瓶瓶底。随传代次数增多，梭形、多角形细胞逐渐增加，其增殖及分泌能力下降，传代周期延长。

图 3 软骨细胞核呈深染的蓝色，细胞质呈浅紫色3.1.3 II 型胶原免疫荧光染色鉴定此法利用软骨细胞分泌的 II 型胶原与抗 II 型胶原抗体特异结合，酶标抗再与抗 II 型胶原抗体结合显色，对软骨细胞作出定性鉴定。原代软骨细胞 II胶原免疫荧光染色后在倒置荧光显微镜下可见细胞及少部分 ECM 为亮绿色，阳性（见图 4）。Collagen II DAPI Merge


本文编号：3500388