趋磁细菌磁小体介导的新型纳米复合物BMs/pHSP-shPLK1/DOX的制备及表征检测

发布时间：2022-01-04 00:18

　　目的构建热激启动子（p HSP,HSP Promoter）驱动的靶向敲低Polo样蛋白激酶1（PLK1）的真核表达质粒,并观察其对骨肉瘤U2OS细胞增殖的影响。方法首先合成热休克蛋白HSP70的启动子,克隆至带有绿色荧光蛋白（GFP）标签的真核表达质粒p EGFP-C1中,利用热激启动子（p HSP）替换原有的CMV启动子,构建真核表达载体p HSP-GFP;其次,利用RNA干扰技术合成以PLK1基因为靶向目标的sh RNA,将其定向克隆至真核表达载体p HSP-GFP中形成重组质粒p HSP-sh PLK1-GFP;另外设计一组阴性对照质粒p HSP-NC-GFP,最后,利用脂质体Lipo2000转染的方法将质粒转染至U2OS细胞,非热激组细胞正常培养,热激组及阴性对照组细胞42℃加热2h,通过细胞免疫荧光染色实验检测GFP的表达,从而确定热激启动子的驱动能力,采用Quantitative real-time PCR的方法检测细胞内PLK1的m RNA表达水平,Western blotting技术检测PLK1蛋白表达水平,利用MTT法检测重组质粒对U2OS细胞增殖的影响。结果成功构建... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

热激启动子（pHSP）序列设计结果

重组质粒pHSP-shPlk1-GFP的测序结果

重组质粒构建示意图

【参考文献】：
期刊论文
[1]反义Snail转录因子对骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响[J]. 程中衡,张泽米,杨芳,柳青梅,栾纯萍.  实用医学杂志. 2010(15)
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本文编号：3567264