印迹基因TSSC3调控自噬抑制骨肉瘤成瘤和转移的作用及分子机制研究

发布时间：2022-01-22 16:47

　　研究背景/目的:骨肉瘤是全世界最常见的骨原发恶性肿瘤,因其高度恶性和侵袭性,一度排行青少年癌症死亡原因的第二位。近20到30年来骨肉瘤的治疗进展十分缓慢,5年或更长期的总生存率并没有得到显著的改善。自噬（Autopahgy）是指通过溶酶体介导的细胞吞噬自身蛋白或细胞器并降解的一种高度保守的细胞现象。很多研究发现,自噬参与了恶性肿瘤的发生和转移,但其作用十分复杂并富有争议。探索自噬在骨肉瘤不同阶段的作用和调控因素,有利于发现骨肉瘤治疗的新分子靶点。TSSC3（Tumor-suppressing STF cDNA 3）是郭乔楠教授课题组在人成骨细胞恶性转化过程中利用基因芯片技术发现的出现明显差异表达的印迹基因之一。前期研究已经证实其在骨肉瘤中起到抑癌基因作用,但其分子机制有待进一步阐明。TSSC3的同源基因PHLDA1,被证实可以调控细胞自噬,提示TSSC3可能对自噬也有一定的调控作用。除此之外,有研究发现自噬调控通路PI3K/Akt/mTOR的活化可能受到Src的影响,而前期研究发现TSSC3可以抑制骨肉瘤Src的分子活性。由此我们推测骨肉瘤细胞中TSSC3可能通过Src与自噬发生联系。... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

-2载体结构图

1-1-1 过表达 TSSC3 后骨肉瘤细胞中自噬相关基因 mRNA 和蛋白表-1 The change of mRNA and protein expression of autophagy relatedTSSC3 overexpressed. *P < 0.05, compared to OverCtrl group

图 2-1-1-2 过表达 TSSC3 后自噬相关蛋白免疫荧光图，标尺 50 μmFig. 2-1-1-2 The image of the IF of autophagy related proteins in TSSC3 overexpressed cells2.1.2 TSSC3 过表达增加骨肉瘤细胞内自噬流接着我们利用透射电镜观察，过表达 TSSC3的 MTF 和 SaOS2 骨肉瘤细胞中，自噬小体或者自噬溶酶体的数量较对照组明显增加（MTF 细胞平均每个细胞含0.45±0.15 个 VS 过表达细胞 2.30±0.53 个，P＜0.01； SaOS2 细胞平均每个细胞含自噬小体或自噬溶酶体 0.30±0.15个细胞球 VS 过表达细胞 2.00±0.63 个，P<0.05，图 2-1-2-1），提示 TSSC3 过表达促进骨肉瘤细胞自噬体的合成。为了进一步区别 TSSC3 导致自噬体的合成是阻滞了晚期自噬导致的堆积还是促进了骨肉瘤细胞的自噬流，我们联合应用了自噬流阻滞剂 CQ。我们先试验了 CQ 的有效浓度（图 2-1-2-2）发现 CQ 在 8μmol/L 的情况下就可以明显抑制骨肉瘤细胞自噬流，接着我们在过表达 TSSC3 的细胞中联合应用 CQ（8μmol/L 浓度），利用 WB 发现 TSSC3+CQ组中 P62 和 LC3II 蛋白水平有进一步明显地增加，提示自噬流通畅；


本文编号：3602552