Bcl2基因过表达的骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤的实验性研究

发布时间：2022-01-24 23:17

　　目的:脊髓损伤是严重的脊柱疾病并发症,常导致损伤节段以下肢体的严重功能障碍,其发病率逐年上升。外源干细胞的移植为脊髓损伤的治疗提供了崭新思路。骨髓间充质干细胞（BMSCs）的自我更新和增值能力较强、来源广泛、分离培养简单,但是由于移植后的BMSCs在宿主体内成活率及转化率较低,因此限制了其广泛应用。B cell lymphoma/leukemia gene 2（Bcl-2）被认为是能够抑制细胞凋亡发生的抗凋亡基因,是调节细胞凋亡的基本成员,能对抗多种原因引起的细胞凋亡,。本实验通过构建大鼠Bcl-2基因过表达载体,转染BMSCs,将其移植入脊髓损伤大鼠的损伤部位,观察疗效。方法:1、培养和传代大鼠BMSCs,使用倒置显微镜进行形态学观察,用流式细胞术检测细胞表面标志性抗原CD44、CD45和CD90。构建及鉴定Bcl-2基因慢表达载体,转染BMSCs,以获得Bcl-2过表达的BMSCs,使用RT-PCR和westernblot技术检测Bcl-2的表达量,使用MTT检测细胞的增值效率。2、健康雄性8周龄SD大鼠20只,随机分为4组,每组5只大鼠,采用分点注射的方法,在大鼠脊髓损伤建模手术... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

左图为光学倒置显微镜（×100）下观察；右图为荧光倒置显微镜（×100）下观察

1 BMSCs 细胞鉴定第三代细胞培养第十二天时，用倒置显微胞体向胞核收缩，细胞呈双极或多极状，胞细长且相互连接交叉，为典型的神经元细胞记物结果显示： CD44 和 CD90 表达阳性，阳阴性，阳性率为 0.9%，结果如图 2 所示。图 1 左图为光学倒置显微镜（×100）下观察；右

RT-PCR检测Bcl-2的表达

【参考文献】：
期刊论文
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[9]大鼠B细胞淋巴瘤-2基因的克隆及其慢病毒表达载体的构建[J]. 王雪峰,何援利.  解放军医学杂志. 2009(01)
[10]bcl-2和bax基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤中的作用[J]. 段有文,吕刚,吴海龙,唐颖,黄涛.  中华实验外科杂志. 2005(10)

硕士论文
[1]经Bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不全兔心功能及血管新生的影响[D]. 高青.河北医科大学 2015
[2]hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[D]. 刘凯.福建医科大学 2012



本文编号：3607477