褪黑素通过Src和PKA平行通路选择性激活CREB依赖基因抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究

发布时间：2023-06-03 19:03

　　目的:观察褪黑素对骨肉瘤细胞增殖和迁移影响,并探讨PKA通路与Src通路介导CREB依赖性基因转录在上述调控过程中的作用。研究方法:对MG-63骨肉瘤细胞进行培养,应用不同浓度的褪黑素对其作用24小时后进行Transwell实验、Celigo划痕实验和CCK-8实验来验证褪黑素对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响;应用最适4m M的浓度的褪黑素、H89对其作用24小时后进行western blot实验以检测p-ERK1/2/p-p90RSK/p-CREB途径磷酸化的表达水平来验证PKA与CREB依赖通路的联系;应用4m M的褪黑素、PP2对其作用24小时后进行western blot实验以检测p-ERK1/2/p-CREB途径磷酸化的表达水平来验证Src与CREB依赖通路的联系;应用4m M的褪黑素、PP2对其作用24小时后进行western blot实验以检测c AMP的表达水平来验证c AMP-PKA与Src通路的关系。结果:(1)不同浓度褪黑素处理组中与对照组相比骨肉瘤细胞增殖均有减少;相比对照组,不同浓度褪黑素处理组Transwell转移率经T-test分析P<0.05;48...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与传代
        2.2.2 细胞增殖实验
        2.2.3 荧光酶报告基因实验
        2.2.4 RT-PCR
        2.2.5 蛋白质免疫印迹
        2.2.6 cAMP水平的量化
        2.2.7 细胞Transwell实验
        2.2.8 Celigo划痕实验
    2.3 统计分析
3 实验结果
    3.1 褪黑素对CREB磷酸化和转录活性的影响
    3.2 PKA与 CREB依赖通路的联系
    3.3 Src与 CREB依赖通路的联系
    3.4 c AMP-PKA与 Src通路的连接
    3.5 褪黑素对骨肉瘤细胞的迁移能力的影响
        3.5.1 细胞Transwell实验
        3.5.2 Celigo划痕检测细胞迁移能力
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3829866