全基因组siRNA文库在骨肉瘤细胞耐药中的作用及其生物学机制研究
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【学位级别】:博士
【部分图文】:
图1.1NEBGibsonDNAAssembly原理示意图
1绪论到骨架质粒上,从而构建了覆盖了人的全基因组siRNA文库逆转录病毒载体质粒。通过质粒的构建,克隆生长计数,菌落PCR及阳性质粒的测序,验证得到文库一次GibsonAssembly可以形成1.8×107个克隆数,并且发现插入片段具有明显的随机性和异质性。
图1.3Molab单次合成的siRNA文库的克隆数Figure1.3BacterialcolonscountingofthesiRNAlibraryfromMolab
图1.2MolabsiRNA文库质粒的基础图Figure1.2TheplasmidofsiRNAlibraryfromMolab文库质粒的覆盖面siRNA文库能够覆盖人的3万个基因,通过它可以筛查哪些基因在肿瘤的及发展中具有决定性的作用,从而诱导肿瘤....
图1.4MolabsiRNA文库质粒的菌落PCR及测序Figure1.4BacterialPCRandsequencingdataofsiRNAlibraryplasmidfromMolab
1绪论样性的菌落除了计数外,还要进行PCR鉴定,如下图构建的siRNA文库质粒的阳性率可以达到90%性结果进行检验测序,发现每一条siRNA的序样性,符合我们预期拟构建能够覆盖人的3万个
图1.5实验技术路线图
图1.5实验技术路线图Figure1.5Thetechnologyroutemapofexperiment1.4课题的特色及创新点①将随机且特异性覆盖人基因组的siRNA文库用逆转录病毒感染的方式导入骨肉瘤SJSA1细胞株中,在短时间内通过Nutlin....
本文编号:3965768
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