PCL膜局部缓释FTY720促进脊髓损伤后的功能恢复

发布时间：2017-07-18 05:04

  本文关键词：PCL膜局部缓释FTY720促进脊髓损伤后的功能恢复

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【摘要】：背景：脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的临床治疗面临着巨大的困难。SCI病人日渐增多,每年每一百万人口中就有约15-40的新发病例。目前临床对于SCI的治疗少之又少,一般的临床治疗意在去除病因、抗炎、减少并发症。SCI的病理过程主要包括神经元的死亡,局部胶质细胞激活形成胶质瘢痕,炎症细胞浸润等。SCI后损伤局部的星形胶质细胞和小胶质细胞会大量分泌鞘氨醇磷酸酯(Sphingosine-1-phosphate, S1P),促进更多的星形胶质细胞和小胶质细胞在损伤局部聚集,形成胶质瘢痕阻止再生。芬戈莫德(Fingolimod,FTY720)是S1P的功能性拮抗剂,它可以不可逆的结合S1P的受体并将其内吞、耗竭。在临床上主要用于治疗缓解复发型多发性硬化症和肾移植后引起的免疫排斥反应。聚已酸内酯(Polycaprolactone,PCL)是一种生物相容性高,可降解的生物材料,PCL在降解后不会酸化局部组织,因此被广泛的用作小分子药物的缓释载体。我们拟研究局部缓释制剂FTY720-PCL膜在SCI后的修复作用及其中的潜在机制。方法：原代星形胶质细胞培养,观察S1P处理对星形胶质细胞迁移和增殖的影响。观察FTY720和S1P共处理对星形胶质细胞的迁移和增殖的影响。制备FTY720-PCL膜以缓释FTY720。构建大鼠和比格犬的SCI模型,局部放置FTY720-PCL膜治疗,损伤后每周对其进行BBB和grid-walk等行为学评分评估其运动功能恢复情况,至造模后第四周取材,通过组织学等观察SCI的预后。结果：FTY720对体外星形胶质细胞增殖和迁移没有明显影响,但可以明显抑制S1P引起的星形胶质细胞的增殖和迁移。FTY720-PCL膜缓释制剂可以缓释释放FTY720约14天。缓释的FTY720可以减少SCI后星形胶质细胞标记物GFAP的表达,明显促进大鼠及比格犬运动功能恢复。结论：通过FTY720-PCL膜缓释给药FTY720可能通过抑制SCI损伤局部的胶质瘢痕形成,提高SCI后的功能恢复。
【关键词】：FTY720 胶质瘢痕 S1P SCI 缓释药物
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 缩略词9-13
• 引言13-15
• 1 实验材料15-17
• 1.1 试剂15
• 1.2 耗材15
• 1.3 仪器15-16
• 1.4 相关溶液的配制16-17
• 2 实验方法17-25
• 2.1 FTY720的缓释材料PCL膜的制备和观察17-18
• 2.2 星形胶质细胞的培养18-19
• 2.3 胞活力(CCK-8)测定19
• 2.4 星形胶质细胞迁移能力测定19
• 2.5 动物实验分组19-20
• 2.6 动物SCI造模20-21
• 2.7 行为学评分21
• 2.8 组织学和免疫荧光染色21-22
• 2.9 WB分析22-23
• 2.10 RT-PCR23-24
• 2.11 统计学分析24-25
• 3 实验结果25-37
• 3.1 星形胶质细胞在原代细胞中的纯度25
• 3.2 FTY720可以抑制S1P/FBS引起的星形胶质细胞的增殖25-27
• 3.3 FTY720可以抑制S1P/FBS引起的星形胶质细胞的迁移27-28
• 3.4 FTY720可以引起星形胶质细胞表面S1P1受体长期内吞28-30
• 3.5 构建FTY720-PCL缓释膜并评估其表征30-32
• 3.6 缓释FTY720减少大鼠SCI后空洞形成并促进其运动功能恢复32-33
• 3.7 缓释FTY720减少比格犬SCI后空洞形成并促进其运动功能恢复33-34
• 3.8 缓释FTY720可以抑制SCI局部星形胶质细胞的聚集34-35
• 3.9 缓释FTY720可以减少SCI后S1P1表达,减少神经元丢失35-37
• 4 讨论37-39
• 5 结论39-40
• 6 参考文献40-44
• 综述44-60
• 参考文献52-60
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果60-61

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