M2巨噬细胞过继免疫对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响

发布时间：2017-09-25 11:59

  本文关键词：M2巨噬细胞过继免疫对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响

  更多相关文章： 脊髓损伤 M2巨噬细胞 过继免疫 功能恢复

【摘要】：研究背景:脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)后多种免疫细胞,如淋巴细胞、单核巨噬细胞等可以浸入损伤局部微环境。有研究表明,巨噬细胞在SCI后的一系列变化中可能起到相当重要的作用。SCI后,经典活化的(Classically activated)促炎症反应M1型巨噬细胞和替代性活化的(Alternatively activated)抗炎症反应的M2型巨噬细胞在SCI微环境中高表达。M1细胞对SCI修复有神经毒性,而M2巨噬细胞对神经细胞的再生有促进作用;SCI后,M1巨噬细胞迅速增多且持续存在,但M2巨噬细胞反应迟缓且持续时间短暂。因此,SCI后,通过提高M2巨噬细胞的比例并延长它们在损伤局部微环境的停留时间,可能是治疗SCI的很有希望的策略。目的:研究M2巨噬细胞过继免疫对SCI的修复作用,并探讨其机制,为SCI的治疗寻找新策略。方法:(1)分离大鼠股骨骨髓,用条件培养基培养7天培养出巨噬细胞(M0),通过不同条件诱导分化得M1和M2巨噬细胞;(2)采用免疫荧光染色法和流式细胞术鉴定M0、M1和M2巨噬细胞的标志及其纯度;(3)采用ELISA法检测M0、M1和M2细胞培养上清中IL-6、NO、IL-10、TNF-αaa和TGF-β的表达水平。(4)采用纽约大学SCI仪制备重物坠落脊髓损伤SD大鼠模型,并于SCI后第7天过继免疫CFSE标记的M0、M1和M2巨噬细胞;(5)应用荧光定量PCR法测定各实验组脊髓损伤中心处IL-4、IL-10、IL-13、IL-6、i NOS和TNF-γ的含量。(6)应用荧光显微镜和流式细胞术检测细胞过继免疫1W后SCI中心及其周围各实验组中M0、M1和M2巨噬细胞的分布和比例;(7)采用免疫组织荧光染色法观察细胞过继免疫1W后各实验组脊髓损伤中心及其周围Th1和Th2细胞的分布与比例;(8)采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分,脚印分析和网格行走实验观察各实验组SCI大鼠运动功能恢复情况;(9)SCI后第6W处死大鼠,取脊髓组织做连续冰冻切片,应用中性红、快蓝、甲苯胺蓝染色法以及电镜观察各组残留脊髓髓鞘化和神经元存活情况。结果:(1)成功分离、培养出M0、M1和M2巨噬细胞,纯度达到实验要求;(2)ELISA法检测M0、M1细胞上清中IL-6、TNF-α和NO的含量明显高于M2巨噬细胞,M2巨噬细胞上清中IL-10、TGF-β含量明显高于其他两组;(3)细胞过继免疫1W后,各组CD68+细胞数没有差别,分别为1096±395、1462±548、1687±540和1585±560/mm2,但M2巨噬细胞过继免疫组CD68+CCR7+细胞(即M1巨噬细胞)明显少于其它3组,CD68+ARG1+细胞(即M2巨噬细胞)明显高于其它3组,其它3组相差不大;(4)M2巨噬细胞过继免疫有利于浸润的单核巨噬细胞以及内源性的小胶质细胞向M2巨噬细胞方向极化,空白对照组、M0、M1和M2细胞过继免疫组M2巨噬细胞分别为38±11、40±10、35±12和512±106/mm 2;(5)M2巨噬细胞过继免疫有利于Th细胞向Th2细胞极化,空白对照组、M0、M1和M2细胞过继免疫组Th2细胞分别为38±13、36±15、41±16和540±146/mm2;(6)荧光定量PCR发现,M2巨噬细胞过继免疫组IFN-γ低表达,IL-10、IL-13高表达,与其它3组比较有显著统计学意义,M1巨噬细胞组IL-6、TNF-α以及i NOS的m RNA表达量明显高于其它3组,有统计学意义;(7)M2巨噬细胞过继免疫能明显提高SCI大鼠的运动功能,表现为M2巨噬细胞组大鼠的BBB评分明显高于其它各组;脚印分析得分明显高于其它各组;网格行走实验正确率也明显高于其它各组,其它各组BBB评分、脚印分析和网格行走实验结果统计学上没有差别;(8)M2巨噬细胞过继免疫组脊髓缺损体积明显小于其他组,有髓鞘的轴突更多以及前角运动神经元存活数量远高于其它3组;结论:SCI后,过继免疫M2巨噬细胞对脊髓组织有神经保护作用,可以促进大鼠运动功能的恢复,M2巨噬细胞通过产生抗炎症细胞因子促进Th细胞向Th2细胞方向极化,而Th2细胞通过分泌一些细胞因子等又可以进一步促进内源性的小胶质细胞或单核巨噬细胞向M2巨噬细胞极化。从而产生促进组织损伤修复的良性循环效应。
【关键词】：脊髓损伤 M2巨噬细胞 过继免疫 功能恢复
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 1.实验材料与仪器12-14
• 2.实验方法14-28
• 3.结果28-41
• 4.讨论41-44
• 5.结论44-45
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 附录A 主要英文缩略词51-52
• 附录B 个人简历和发表论文52-53
• 附录C 综述53-61
• 参考文献59-61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;豚鼠巨噬细胞经P_(204)处理后的抗石英细胞毒作用[J];国外医学参考资料(卫生学分册);1976年04期

2 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期

3 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一种分离巨噬细胞的简单方法[J];滨州医学院学报;1990年02期

5 谢志坚;巨噬细胞异质性[J];医学综述;2001年06期

6 饶艳;运动及神经内分泌对巨噬细胞功能的调节[J];体育与科学;2002年05期

7 朱金元;;吸烟对肺巨噬细胞的影响[J];浙江医学教育;2003年01期

8 张俊峰;过氧化物酶体增殖物激活受体与单核/巨噬细胞系[J];医学综述;2004年03期

9 韦锦学;顾军;;巨噬细胞的激活诱导死亡[J];生命科学;2006年02期

10 李晓曦;郭宁;曹雪涛;;肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤生长与转移的研究现状[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年

7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 周赤燕;巨噬细胞MsrA对动脉粥样硬化的干预研究[D];武汉大学;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白调控细胞增殖和炎症的机制研究[D];山东大学;2015年

3 张瑜;DKK1抑制巨噬细胞内脂质沉积及其相关分子机制[D];山东大学;2015年

4 孟涛;异丙酚对心脏收缩功能的抑制作用及其对巨噬细胞分泌功能调节的机制研究[D];山东大学;2015年

5 周兴;基于酵母微囊构建新型口服巨噬细胞靶向递送系统的研究[D];第三军医大学;2015年

6 蒋兴伟;Tim-3对巨噬细胞极化的调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

7 刘伯玉;清道夫受体A介导小鼠巨噬细胞吞噬钩端螺旋体研究[D];上海交通大学;2013年

8 杨绍俊;miRNA-155介导ESAT-6诱导巨噬细胞凋亡的分子机制及其在结核诊断中的作用[D];第三军医大学;2015年

9 翟光耀;单核/巨噬细胞Ly6C~(low)亚群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京协和医学院;2014年

10 韩露;TRB3介导的脂肪组织巨噬细胞极化与糖尿病冠状动脉病变关系的研究[D];山东大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介导巨噬细胞极化效应对动脉粥样硬化作用的研究[D];福建医科大学;2015年

2 张译丹;盐皮质激素受体拮抗剂调控巨噬细胞表型对实验性矽肺的作用[D];河北医科大学;2015年

3 卢文冉;HCV core蛋白作用的巨噬细胞培养上清对肝细胞生物学性状的影响[D];河北医科大学;2015年

4 李文建;载脂蛋白E影响巨噬细胞因子表达及分型的机制研究[D];河北医科大学;2015年

5 曹爽;高糖对巨噬细胞TLR4信号转导的调节作用[D];河北医科大学;2015年

6 宁程程;肿瘤相关巨噬细胞在子宫内膜癌雌激素敏感性中的作用及机制研究[D];复旦大学;2014年

7 高龙;PLD4在肿瘤相关巨噬细胞抑制结肠癌增殖中的作用研究[D];成都医学院;2015年

8 任虹;感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠抑制巨噬细胞CCL5分泌的机制研究[D];河北医科大学;2015年

9 李美玲;双酚A对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究[D];安徽医科大学;2015年

10 刘琼;黄芪多糖影响巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用及机制研究[D];新乡医学院;2015年

，

本文编号：917205