HMGB1在BMSC移植治疗MODS大鼠中的表达研究

发布时间：2017-09-25 19:13

  本文关键词：HMGB1在BMSC移植治疗MODS大鼠中的表达研究

  更多相关文章： 大鼠 多器官功能障碍综合征 疾病模型 大鼠 多器官功能障碍综合征 骨髓间充质干细胞 高迁移率族蛋白 炎症

【摘要】：第一部分SD大鼠MODS模型的建立[目的]比较多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction sydrome, MODS)大鼠模型的不同制作方法,以确立最适宜、最稳定的MODS的大鼠模型制作方案以供后期研究。[方法]成年健康雌性Sprague Dawley大鼠,体重190-210g,随机分成9组,每组20只,A组轻度失血(血容量15%)+脂多糖腹腔注射30mg/kg;B组轻度失血(血容量15%)+脂多糖静脉注射5mg/kg;C组脂多糖静脉注射5mg/kg;D组脂多糖静脉注射4mg/kg；E组脂多糖静脉注射3mg/kg；F组脂多糖静脉注射2mg/kg;G组脂多糖静脉注射1mg/kg;H组脂多糖静脉注射0.5mg/kg;Ⅰ组假手术组静脉注射PBS 0.5ml/200g。造模后观察各组大鼠行为学及死亡率,24h抽血测肝功(ALT、AST)、肾功(BUN、Cr)、心肌酶学(CK-MB、LDH)以及血常规(WBC、PLT),之后对大鼠进行解剖,观察对比病理切片结果,综合选定最佳方案。[结果]组间死亡率比较中A、B、C三组相同,均为90%,D、E组相同为80%,F、G组相同为60%,H组死亡率为40%,Ⅰ组死亡率为0；肝功、肾功、心肌酶学及血常规检测中A-G组均较Ⅰ组有显著差异,H组与Ⅰ组无显著差异;大体标本显示A-C组器官损伤严重,充血、淤血、水肿；病理切片显示A-G均有炎性细胞浸润及出血水肿等急性损伤表现。[结论]F、G两组方案动物存活率相对较高,动物多个器官功能障碍,其中G组所用脂多糖剂量相对较少,为研究MODS最佳模型方法。第二部分HMGB1在BMSC移植治疗MODS大鼠中的表达研究[目的]通过探究高迁移率族蛋白B1 (High mobility group protein B1, HMGB1)等炎症因子在骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治疗多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction sydrome, MODS)大鼠中的表达定位、表达含量的变化,以此来探讨BMSC移植治疗MODS大鼠的相关可能机制。[方法]体外获得并培养BMSC,用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记,经外周静脉输入移植。成年雌性SD大鼠随机分成3组,假手术组20只,模型组40只,移植组40只。脂多糖静脉注射(1mg/kg)造模后2h内外周静脉输注干细胞2*10^6个/ml*0.5m1/只。移植组、模型组各取第1天心、肝、脾、肺、肾、肠组织制作切片,分别观察GFP-BMSC在MODS大鼠中的归巢以及HMGB1在MODS大鼠的的定位表达；取1、3、7、14天心、肝、脾、肺、肾、肠组织并通过Q-PCR、WesternBlot技术检测HMGB1在心、肝、脾、肺、肾组织中的表达变化。[结果]体外培养的BMSC能够正常贴壁成长并具有相应的分化能力,GFP转染后不影响其正常生长及分化能力,抗原表达为CD34-/CD45-/CD90+/CD44+。移植后第1天在动物的组织切片中发现心、肝、脾、肺、肾器官组织中有绿色荧光存在,说明BMSC已经发生归巢；免疫组化结果显示HMGB1在模型组中向胞浆转移；Q-PCR、WesternBlot检测结果显示正常心、肝、脾、肺、肾组织中均有HMGB1的表达；模型组大部分脏器HMGB1的表达量较正常组明显增加(P0.05),而移植组大部分脏器HMGB1的表达量低于模型组(P0.05)。[结论]①建立了GFP标记的SD大鼠BMSC的体外分离、培养及鉴定的技术平台。② Q-PCR、WesternBlot结果显示正常组织心、肝、脾、肺、肾脏器中均有HMGB1的表达,而BMSC能够下调HMGB1在MODS模型动物的心、肝、脾、肺、肾组织中的表达,提示BMSC移植可以降低炎症反应,有望为MODS提供新的治疗方法。
【关键词】：大鼠 多器官功能障碍综合征 疾病模型 大鼠 多器官功能障碍综合征 骨髓间充质干细胞 高迁移率族蛋白 炎症
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 第一部分 SD大鼠MODS模型的建立12-33
• 前言12-14
• 材料与方法14-21
• 结果21-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-33
• 第二部分 HMGB1在BMSC移植治疗MODS大鼠中的表达研究33-78
• 前言33-37
• 材料与方法37-52
• 结果52-68
• 讨论68-73
• 结论73-74
• 参考文献74-78
• 综述一78-85
• 参考文献82-85
• 综述二85-93
• 参考文献90-93
• 攻读学位期间获得的学术成果及获奖93-94
• 致谢94-96
• 附件96

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