以RUNX3为靶点干预内皮间质转分化的研究

发布时间：2017-10-13 10:24

  本文关键词：以RUNX3为靶点干预内皮间质转分化的研究

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【摘要】：目的1.观察转化生长因子-β1(TGF-β1)引起内皮细胞间质转分化及其与Runt相关性转录因子3(Runx3)的关系。2.观察Runx3对内皮间质转分化的影响。3.探讨Runx3影响血管内皮间质转分化的相关机制。方法1.将血管内皮细胞分组:①Control组:普通培养液培养血管内皮细胞6天;②1 ng/ml组:含1 ng/ml TGF-β1的普通培养液培养血管内皮细胞6天;③5 ng/ml组:含5 ng/ml TGF-β1的普通培养液培养血管内皮细胞6天;④10 ng/ml组:含10 ng/ml TGF-β1的普通培养液培养血管内皮细胞6天;⑤10 ng/ml+Runx3-si RNA病毒组:待病毒转染72小时后,再加含10 ng/ml TGF-β1的普通培养液培养血管内皮细胞6天。2.应用q RT-PCR法分别测定各组细胞Runx3、血小板-内皮细胞粘附分子(CD31)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、SNAILm RNA的表达;Western blot法测定各组细胞Runx3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、SNAIL,(内皮型一氧化氮合酶)e NOS蛋白的表达并比较。同时运用ELISA检测试剂盒检验(血管内皮生长因子)VEGF。结果1.成功构建Runx3-si RNA慢病毒载体,病毒感染72h,感染复数(MOI)=30时,病毒转染效率最强。2.q RT-PCR法检测各组细胞CD31m RNA、α-SMA m RNA、SNAILm RNA、Runx3m RNA表达,结果显示:与Control组相比,添加1ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞CD31m RNA表达下调(P0.05)、α-SMAm RNA表达上调(P0.05)、SNAILm RNA表达上调(P0.05)、Runx3m RNA表达上调(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞CD31m RNA表达下调(P0.05)、α-SMAm RNA表达上调(P0.05)、SNAILm RNA表达上调(P0.05)、Runx3m RNA表达上调(P0.01);添加10ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞CD31m RNA表达下调(P0.05)、α-SMAm RNA表达上调(P0.05)、SNAILm RNA表达上调(P0.01)、Runx3m RNA表达上调(P0.01)。与10ng/ml TGF-β1组相比,添加Runx3-si RNA病毒相应组血管内皮细胞CD31m RNA表达上调(P0.05)、α-SMAm RNA表达下调(P0.05)、SNAILm RNA表达下调(P0.05)、Runx3m RNA表达下调(P0.05)。3.Western blot法检测各组细胞Runx3、SNAIL、e NOS、p-AKT蛋白表达,结果显示:与Control组相比,添加1ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞Runx3表达上调(P0.05)、SNAIL表达上调(P0.05)、e NOS表达下调(P0.05)、p-AKT表达上调(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞Runx3表达上调(P0.01)、SNAIL表达上调(P0.05)、e NOS表达下调(P0.05)、p-AKT表达上调(P0.05);添加10ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞Runx3表达上上调(P0.01)、SNAIL表达上调(P0.01)、e NOS表达下调(P0.05)、p-AKT表达上调(P0.05)。与10ng/ml TGF-β1组相比,添加Runx3-si RNA病毒相应组血管内皮细胞Runx3表达下调(P0.01)、SNAIL表达下调(P0.01)、e NOS表达上调(P0.01)、p-AKT表达上调(P0.01)。4.ELISA检测试剂盒检验VEGF表达,结果显示:与Control组相比,添加1ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞VEGF表达上调(P0.05);添加5ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞VEGF表达上调(P0.05);添加10ng/ml TGF-β1组血管内皮细胞VEGF表达上调(P0.05)。与10ng/ml TGF-β1组相比,添加Runx3-si RNA病毒相应组血管内皮细胞VEGF表达上调(P0.05)。结论1.TGF-β1可以引起血管内皮细胞间质转分化,Runx3参与其中。2.下调Runx3的表达能够减轻内皮间质转分化。3.下调Runx3的表达能够降低SNAIL的表达,增加e NOS、VEGF的表达,并激活AKT,可能参与减轻内皮间质转分化的机制。
【关键词】：TGF-β1 心肌纤维化 内皮间质转分化 Runx3
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法——实验材料13-27
• 2.1 实验所用细胞13
• 2.2 主要实验仪器13-14
• 2.3 主要仪器14-15
• 2.4 实验方法15-26
• 2.4.1 器材的灭菌、去RNA酶处理15
• 2.4.2 相关液体的配制15-17
• 2.4.3 人血管内皮细胞株(CRL-1730人血管内皮细胞)的体外培养17-19
• 2.4.4 实验分组19
• 2.4.5 qRT-PCR检测各组血管内皮RUNX3、SNAIL、CD31、α-SMA等mRNA的表达19-21
• 2.4.6 Western blot Western blot检测各组RUNX3、p-AKT、SNAIL、eNOS蛋白的表达21-24
• 2.4.7. 血管内皮生长因子（VEGF）ELISA检测试剂盒检验VEGF水平24-26
• 2.5 统计学分析26-27
• 第3章 结果27-39
• 3.1 人血管内皮细胞（CRL-1730细胞株）生长特点27
• 3.2 Runx3-siRNA病毒感染CRL-1730细胞株结果27-30
• 3.3 qRT-PCR检测各组CRL-1730细胞Runx3 mRNA的表达30-31
• 3.4 Western blot检测各组CRL-1730细胞Runx3蛋白的表达31-32
• 3.5 qRT-PCR检测各组CRL-1730细胞CD31 mRNA的表达32-33
• 3.6 qRT-PCR检测各组CRL-1730细胞 α-SMA mRNA的表达33-34
• 3.7 qRT-PCR检测各组CRL-1730细胞SNAILmRNA的表达34-35
• 3.8 Western blot检测各组CRL-1730细胞SNAIL蛋白的表达35-36
• 3.9 Western blot检测各组CRL-1730细胞p-AKT蛋白的表达36-37
• 3.10 Western blot检测各组CRL-1730细胞eNOS蛋白的表达37-38
• 3.11血管内皮生长因子VEGF的检测水平38-39
• 第4章 讨论39-43
• 4.1 TGF-β1 诱导内皮间质转分化39
• 4.2 Runx3在血管内皮细胞间质转分化中的作用39-40
• 4.3 Runx3影响血管内皮细胞间质转分化中的可能机制40-43
• 4.3.1 Runx3对SNAIL的影响在内皮间质转分化的作用40-41
• 4.3.2 Runx3对血管内皮细胞功能的影响在内皮间质转分化的作用41-42
• 4.3.3 Runx3对AKT的影响在内皮间质转分化的作用。42-43
• 第5章 结论与展望43-44
• 5.1 结论43
• 5.2 展望与不足43-44
• 致谢44-45
• 参考文献45-49
• 攻读学位期间的研究成果49-50
• 综述50-55
• 参考文献53-55

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1 苏震,郑法雷,李艳,段琳;转化生长因子-β1和表皮生长因子在诱导人肾小管上皮细胞转分化中的作用[J];中华检验医学杂志;2002年05期

2 梅煜明,张t，

本文编号：1024323