尼古丁在腹主动脉瘤形成中的作用及分子机制研究

发布时间：2017-10-19 02:45

  本文关键词：尼古丁在腹主动脉瘤形成中的作用及分子机制研究

  更多相关文章： 主动脉瘤 尼古丁 基质金属蛋白酶 血管平滑肌细胞 巨噬细胞 趋化因子

【摘要】：背景:吸烟是主动脉瘤形成和进展的重要危险因素,尼古丁是香烟的主要组成成分。在我们前期研究成果中,体内实验部分,尼古丁联合血管紧张素II诱导了10-12个月龄的雄性C57BL/6J小鼠主动脉瘤的形成,并检测到主动脉瘤组织中p-JNK、CD68+、MMP-2和MMP-9高表达;体外实验部分,尼古丁诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)在m RNA水平VCAM-1、MMP-2和MMP-9呈剂量依赖性表达,并可能通过JNK信号通路发挥调控作用。目的:在前期研究成果基础上,为了进一步研究尼古丁对主动脉平滑肌细胞和巨噬细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达和活性的影响及机制;以及尼古丁对主动脉平滑肌细胞趋化因子表达的调控作用,对巨噬细胞趋化性的影响,再结合趋化因子在动脉瘤组织中的定位表达,从而阐明尼古丁诱导主动脉瘤发生及早期进展的可能分子机制。方法:第一部分,不同浓度尼古丁(0,0.5,5,50,500ng/ml)处理小鼠主动脉平滑肌细胞(MOVAS)和巨噬细胞(RAW 264.7),观察对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达和活性的影响;JNK抑制剂(SP600125)和α7-n ACh Rs受体激动剂(PNU-282987)处理两种细胞,观察对尼古丁诱导的MMP-2和MMP-9表达和蛋白活性的影响。第二部分,动物实验部分,免疫组化染色法测定主动脉瘤组织中趋化因子MCP-1和RANTES的表达和定位;细胞实验部分,尼古丁处理小鼠主动脉平滑肌细胞,real time PCR法和ELISA法检测MCP-1和RANTES表达的影响,进一步transwell法观察尼古丁通过对MOVAS细胞的调控对巨噬细胞趋化活性的影响;JNK抑制剂SP600125和α7-n ACh Rs受体激动剂PNU-282987处理MOVAS细胞,real time PCR法和ELISA法检测MCP-1和RANTES表达的影响,transwell法观察尼古丁通过介导主动脉平滑肌细胞对巨噬细胞趋化活性的影响。结果:在主动脉平滑肌细胞,尼古丁以浓度依赖性方式诱导MMP-2和MMP-9的表达和活性,以及趋化因子MCP-1和RANTES的表达,0.5ng/ml和5ng/ml时明显增强,500ng/ml时明显抑制。而SP600125和PNU282987明显抑制或消除了0.5ng/ml尼古丁产生的上述作用。尼古丁诱导的腹主动脉瘤组织中MCP-1和RANTES显著高表达于中膜和外膜,尼古丁可以通过介导主动脉平滑肌细胞MCP-1和RANTES的表达调控巨噬细胞的趋化活性,JNK抑制剂可以抑制经尼古丁诱导的巨噬细胞趋化活性。结论:尼古丁以浓度依赖性方式诱导MMP-2和MMP-9的表达和活性,JNK信号轴参与调控尼古丁诱导的主动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达和活性。尼古丁可以通过介导主动脉平滑肌细胞趋化因子MCP-1和RANTES的表达,调控巨噬细胞的趋化活性,促进炎症反应的发生或进展,可能在主动脉形成过程发挥重要的始动作用。
【关键词】：主动脉瘤 尼古丁 基质金属蛋白酶 血管平滑肌细胞 巨噬细胞 趋化因子
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.16
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 符号和单位说明11-13
• 绪论13-21
• 第一部分 尼古丁对小鼠巨噬细胞和血管平滑肌细胞中MMP-2、MMP-9 的调控作用及分子机制21-38
• 1. 材料与方法23-31
• 1.1. 试剂与仪器23-25
• 1.2. 细胞培养25-26
• 1.3. Western blot分析26-28
• 1.4. 明胶酶谱（zymography）28-31
• 1.5. 统计学分析31
• 2. 结果31-35
• 2.1. 尼古丁呈剂量依赖性诱导小鼠血管平滑肌细胞和巨噬细胞MMP-2、MMP-9 蛋白表达和活性31-33
• 2.2 尼古丁经JNK信号通路调控MOVAS细胞和RAW264.7 细胞MMP-2 和MMP-9蛋白的表达和活性33-35
• 3. 讨论35-37
• 4. 结论37-38
• 第二部分 尼古丁诱导血管平滑肌细胞对巨噬细胞趋化活性的在主动脉瘤形成中的作用及机制研究38-59
• 1. 材料和方法39-51
• 1.1. 试剂和仪器39-42
• 1.2. 动物实验42-43
• 1.3. 细胞培养43
• 1.4. 组织学分析43-45
• 1.5. RNA抽提和实时定量PCR45-49
• 1.6. 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA）49-50
• 1.7. Transwell细胞迁移实验50-51
• 1.8. 统计学分析51
• 2. 结果51-55
• 2.1. 尼古丁诱导的主动脉瘤组织中MCP-1、RANTES高表达51-52
• 2.2. 尼古丁对小鼠血管平滑肌细胞MCP-1 和RANTES表达的调节呈剂量依赖性52-53
• 2.3. 尼古丁经JNK信号通路调控血管平滑肌细胞MCP-1 和RANES的表达53-54
• 2.4. 尼古丁介导血管平滑肌细胞经JNK通路调控巨噬细胞趋化活性54-55
• 3. 讨论55-58
• 4. 结论58-59
• 全文总结59-61
• 1. 尼古丁呈剂量依赖性诱导小鼠主动脉平滑肌细胞和巨噬细胞MMP-2 和MMP-9蛋白表达和活性59
• 2. JNK信号轴调控尼古丁诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞和巨噬细胞MMP-2 和MMP-9 的蛋白表达和活性59
• 3. MCP-1 和RANTES参与主动脉瘤形成59-60
• 4. 尼古丁以浓度依赖性诱导主动脉平滑肌细胞MCP-1 和RANTES表达，同时调控巨噬细胞趋化活性60
• 5. JNK信号通路参与尼古丁诱导主动脉平滑肌细胞MCP-1 和RANTES表达，同时调控巨噬细胞趋化活性60-61
• 参考文献61-66
• 综述 Micro RNA 在腹主动脉瘤发生中的可能调控机制66-73
• 参考文献70-73
• 致谢73-74
• 攻读学位期间发表的学术论文和科研成果目录74-75
• 附：毕业答辩会现场照片75

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 许锁春,耿希刚,王海晨,刘建林;腹主动脉瘤外科治疗1例报告[J];西安医科大学学报;2002年01期

2 张强;炎性腹主动脉瘤的诊断及外科治疗[J];中国实用外科杂志;2002年03期

3 田成武,朱华文,曲明,姜田军,张卫国,杜英东;腹主动脉瘤13例临床分析[J];临床军医杂志;2002年01期

4 田成武,朱华文,曲明,姜田军,张卫国,杜英东;腹主动脉瘤破裂大出血救治成功1例[J];实用医药杂志;2002年10期

5 肖康雅;巨大腹主动脉瘤破裂1例[J];中华超声影像学杂志;2002年08期

6 潘要干;腹主动脉瘤腔内修补后的监控[J];中国介入心脏病学杂志;2002年01期

7 连福珍;腹主动脉瘤10例诊治体会[J];广东医学;2003年02期

8 刘威,张克政;腹主动脉瘤的诊断与外科治疗[J];实用诊断与治疗杂志;2003年05期

9 杨培红,白峰;腹主动脉瘤破裂1例[J];罕少疾病杂志;2003年06期

10 徐斌,周颖奇,何天霖,梅举,许华,钱宝华,曹贵松,景在平;多学科联合治疗破裂性腹主动脉瘤[J];中华急诊医学杂志;2003年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 潘松龄;;腹主动脉瘤若干问题探讨[A];浙江省中西医结合学会周围血管疾病专业委员会第一次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年

2 秋阳;李治安;孙琳;孟冷;;超声诊断腹主动脉瘤破裂的临床应用研究[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年

3 赖梅芳;范文丹;;彩超对腹主动脉瘤的诊断价值[A];中国超声医学工程学会第八届全国腹部超声学术会议论文汇编[C];2010年

4 张生奕;;腹主动脉瘤破裂1例报告[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年

5 杨显红;;腹主动脉瘤病人的健康教育[A];全国神经内外科专科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2004年

6 ;腹主动脉瘤的诊断与急救处理[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年

7 汪翠萍;李志娟;李红光;;手术治疗腹主动脉瘤36例护理体会[A];全国外科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2008年

8 马旭;吕忠;程云霄;;肾下腹主动脉瘤外科治疗[A];2008年浙江省血管外科年会论文汇编[C];2008年

9 陈花;;腹主动脉瘤的超声研究进展[A];中国超声医学工程学会第九届全国腹部超声医学学术会议论文汇编[C];2012年

10 郝沪明;;腹主动脉瘤膜支架放置术后的彩超随访扫查[A];中国超声医学工程学会第九届全国腹部超声医学学术会议论文汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 吴美华;对腹主动脉瘤应积极进行药物治疗[N];中国医药报;2008年

2 北京协和医院血管外科中心 刘昌伟邋陈跃鑫;腹主动脉瘤 难辨的凶手[N];健康报;2008年

3 程怀孟;直径小于5厘米腹主动脉瘤可保守治疗[N];卫生与生活报;2009年

4 记者 朱国旺;腹主动脉瘤一旦发现应立即治疗[N];中国医药报;2010年

5 程智;凶险的腹主动脉瘤[N];大众卫生报;2004年

6 本报记者 张磊;80%腹主动脉瘤患者为男性[N];健康报;2013年

7 陈祖亮邋记者 胡德荣;巨大腹主动脉瘤破裂患者获救[N];健康报;2007年

8 上海长海医院血管外科 张雷邋景在平;腹主动脉瘤需手术[N];健康报;2007年

9 上海交通大学医学院附属第九人民医院血管外科主任医师 黄新天;人体“定时炸弹”——腹主动脉瘤[N];上海科技报;2008年

10 健康时报记者 赵晴晴;血管超声查腹主动脉瘤[N];健康时报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 左尚维;细胞外基质降解通路相关基因多态性和血清MMP-2蛋白水平与腹主动脉瘤的关联[D];中国人民解放军医学院;2015年

2 魏战杰;地高辛拮抗RORγt活性减缓实验性腹主动脉瘤进展的研究[D];华中科技大学;2015年

3 刘琮琳;哮喘在人和小鼠腹主动脉瘤发病中的作用及机制研究[D];郑州大学;2016年

4 聂皓;趋化因子受体CXCR2促进腹主动脉瘤发生的作用机制研究及血管生成素相关生长因子在腹主动脉瘤血浆中的变化[D];北京协和医学院;2016年

5 辛群;超声技术在腹主动脉瘤瘤壁运动和组织特性研究中的应用[D];第二军医大学;2008年

6 符洋;贝纳普利抑制家兔肾下腹主动脉瘤形成的研究[D];中南大学;2009年

7 冯翔;细胞外基质代谢在腹主动脉瘤发病中的作用[D];第二军医大学;2001年

8 熊江;壁应力分布个体化预测腹主动脉瘤破裂的初步研究[D];第二军医大学;2005年

9 吴晓飞;雌激素在腹主动脉瘤形成中的作用[D];中国医科大学;2007年

10 陈泉;彩色室壁运动和背向散射积分技术在腹主动脉瘤破裂风险预测中应用的初步研究[D];第二军医大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王建国;影响腹主动脉瘤延展及预后相关因素的临床研究[D];中国人民解放军医学院;2012年

2 吴s，

本文编号：1058613