OCT4和bFGF对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的作用及其分子机制研究

发布时间：2017-10-20 13:20

  本文关键词：OCT4和bFGF对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的作用及其分子机制研究

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【摘要】：目的本论文研究OCT4、b FGF对HUVECs增殖、迁移的作用及其相关分子机制,为阐明调控血管内皮细胞增殖、迁移的分子机制提供依据,为地砷病血管损伤的修复提供新思路。方法分别添加DOX诱导细胞OCT4高表达(Tet-on调控的OCT4慢病毒表达载体转导HUVECs,经DOX诱导)、添加b FGF进行培养。通过CCK8法检测细胞增殖、划痕实验法检测细胞迁移、基因芯片分析法在全基因组范围内筛选不同方式诱导的差异基因,然后对增殖、迁移相关基因进行功能分类分析,通过实时定量PCR进一步检测分析。结果1.添加DOX培养的HUVECs组,活细胞数明显高于未添加DOX培养组;细胞损伤修复的相对迁移距离二者没有显著差别。2.在添加b FGF培养的HUVECs组中活细胞数与未添加b FGF培养组没有显著的差别;细胞损伤修复的相对迁移距离明显高于未添加b FGF培养组。3.基因芯片分析各组差异表达基因,根据基因的生物过程分类,在OCT4作用后的HUVECs差异表达基因中筛选出与增殖相关的323个差异表达基因,其中上调的有172个,下调的有151个。4.基因芯片分析各组差异表达基因,根据基因的生物过程分类,在b FGF作用后HUVECs差异表达基因中筛选出与迁移相关的36个差异表达基因,其中上调的有19个,下调的有17个。5.RT-QPCR结果验证,HUVECs中OCT4过表达之后,EGR1、JUN、和WISP1表达水平相对提高。6.RT-QPCR结果验证,b FGF培养的HUVECs中,MMP1、MMP3、KRT13表达水平相对提高,CHD22表达水平相对降低。结论1.OCT4促进HUVECs的增殖,但不改变HUVECs的迁移能力。2.b FGF增加HUVECs的迁移能力,但不改变HUVECs的增殖能力。3.OCT4可能通过调节EGR1和WISP1、JUN表达从而参与促进HUVECs增殖。4.b FGF可能通过调节MMP1、MMP3和CDH22、KRT13表达从而参与促进HUVECs迁移。
【关键词】：细胞增殖 迁移 人脐静脉内皮细胞 OCT4 碱性成纤维细胞生长因子
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文缩略词表10-13
• 第1章 绪论13-20
• 1.1 地砷病与血管损伤13-14
• 1.2 血管内皮细胞和新血管的形成14-15
• 1.3 内皮祖细胞EPC特性与生物学功能15-16
• 1.4 转录因子OCT416-17
• 1.5 碱性成纤维生长因子bFGF17-18
• 1.6 Tet-on系统18-20
• 第2章 材料与方法20-29
• 2.1 材料20-22
• 2.1.1 主要仪器和设备20-21
• 2.1.2 主要试剂21
• 2.1.3 主要试剂的配制21-22
• 2.2 研究方法22-29
• 2.2.1 细胞培养22-23
• 2.2.2 CCK8法检测细胞增殖23-24
• 2.2.3 划痕法检测细胞迁移24
• 2.2.4 RNA提取以及实时定量PCR分析24-27
• 2.2.5 基因芯片分析27-28
• 2.2.6 统计学分析28-29
• 第3章 研究结果29-45
• 3.1 DOX诱导OCT4表达29-30
• 3.2 OCT4对HUVECS增殖和迁移能力的作用30-33
• 3.2.1 OCT4 对 HUVECs 增殖能力的作用30-31
• 3.2.2 OCT4对HUVECs迁移能力的作用31-33
• 3.3 bFGF对HUVECS增殖和迁移能力的作用33-35
• 3.3.1 bFGF对HUVECs增殖能力的作用33
• 3.3.2 bFGF促进HUVECs迁移能力33-35
• 3.4 基因芯片检测HUVECS不同方式处理后的差异表达基因35-42
• 3.4.1 OCT4改变HUVECs表达谱35-39
• 3.4.2 bFGF改变HUVECs表达谱39-42
• 3.5 RT-QPCR检测增殖和迁移相关基因的差异表达42-45
• 3.5.1 RT-QPCR检测OCT4促HUVECs增殖相关基因的差异表达42-43
• 3.5.2 RT-QPCR检测bFGF促HUVECs迁移相关基因的差异表达43-45
• 第4章 讨论45-49
• 4.1 序言45
• 4.2 OCT4调节HUVECS的增殖和迁移能力45-47
• 4.3 bFGF调节HUVECS的增殖和迁移能力47-49
• 第5章 结论49-50
• 参考文献50-57
• 作者在学期间取得的科研成果57-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1067368