同型半胱氨酸与特发性心房颤动的关系及对心房肌细胞Cx43表达的影响

发布时间：2017-10-24 03:47

  本文关键词：同型半胱氨酸与特发性心房颤动的关系及对心房肌细胞Cx43表达的影响

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【摘要】：目的:我们前期研究发现,同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平升高与心房颤动(房颤,atrial fibrillation,AF)射频消融术后复发呈独立相关。为此,本研究首先拟从临床观察特发性心房颤动患者血浆Hcy水平,进一步验证Hcy与心房颤动的关系,其次从细胞水平观察不同浓度Hcy干预对心房肌细胞MDA(丙二醛,malonaldehyde,MDA)含量、SOD(超氧化物歧化酶,superoxide dismutase,SOD)活力、GSH(谷胱甘肽氧化酶,glutathione,GSH)活力及Cx43(缝隙连接蛋白43,conexin43,Cx43)表达的变化。初步探讨Hcy对心房肌细胞的影响。方法:1、收集2013.12-2015.2在我院住院的特发性心房颤动患者73例,检测患者血浆Hcy水平。同时以30例健康人作为对照。2、SD乳鼠心房肌细胞培养,用α-actinin肌动蛋白进行心房肌细胞鉴定。3、Hcy干预:将心房肌细胞分为五组:空白对照组、Hcy干预组(分别含10、50、100和200μmol/L Hcy的细胞培养液),培养24h、48h、72h。倒置显微镜下观察各组心房肌细胞的形态结构及生长状态。用CCK-8法检测细胞存活率。4、用试剂盒检测心房肌细胞MDA含量、SOD和GSH的活力变化。5、用Western blot法检测心房肌细胞Cx43的表达变化。结果:1.特发性心房颤动组与正常对照组相比,Hcy水平高于对照组(p0.05)。2.不同浓度的Hcy作用于心房肌细胞后,随着Hcy浓度的增大与作用时间的延长,心房肌细胞的存活率下降,在200μmol/L的Hcy干预72h时,心房肌细胞存活率最低。3.与空白对照组相比,Hcy干预24h组(100μmol/L、200μmol/L),48h组和72h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)MDA含量升高(p0.05)。Hcy干预72h组与24h组(50μmol/L、200μmol/L)相应浓度相比MDA含量升高(p0.05),Hcy干预72h组与48h组(50μmol/L、200μmol/L)相应浓度相比MDA含量升高(p0.05)。4.与空白对照组相比,Hcy干预24h(100μmol/L、200μmol/L)组,48h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)和72h(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)组SOD活力降低(p0.05)。Hcy干预72h组(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与24h组相应浓度相比SOD活力降低(p0.05),Hcy干预72h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与48h组相应浓度相比SOD活力降低(p0.05)。5.与空白对照组相比,Hcy干预24h组(100μmol/L、200μmol/L),48h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)和72h组(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)GSH活力下降(p0.05)。Hcy干预72h组(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与24h组相应浓度相比GSH活力下降(p0.05),Hcy干预72h组(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与48h组相应浓度相比GSH活力下降(p0.05)。6.Western blot蛋白检测发现:不同浓度Hcy干预72h时,心房肌细胞Cx43的表达随浓度升高呈现下降趋势;200μmol/L Hcy分别干预24h,48h,72h时,心房肌细胞Cx43的表达随时间增加也呈现下降趋势。结论:1、特发性心房颤动患者体内Hcy水平高于正常对照组,Hcy可能与心房颤动独立相关。2、在Hcy的干预下,心房肌细胞MDA含量升高、SOD活力降低、GSH活力下降,并表现一定的时间-剂量效应关系,表明Hcy对心房肌细胞产生了明显的氧化应激和细胞损伤。3、Hcy引起心房肌细胞Cx43表达下降;且呈剂量依赖性,可能是Hcy引起心房肌细胞电重构的机制之一。
【关键词】：心房颤动 同型半胱氨酸 缝隙连接蛋白43 心房肌细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.75
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 英文缩略词8-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 病例样本选择12
• 2.2 细胞株12
• 2.3 仪器及设备12-13
• 2.4 试剂13-14
• 2.5 原代心房肌细胞培养14-17
• 2.6 CCK-8法测定Hcy对心房肌细胞毒性17-18
• 2.7 总蛋白的测定18
• 2.8 超氧化物歧化酶（SOD）的测定18-19
• 2.9 谷胱干肽氧化酶（GSH）的测定19-20
• 2.10 丙二醛（malonaldehyde,MDA)的测定20
• 2.11 Western blot20-23
• 2.12 统计学分析方法23-24
• 第3章 结果24-37
• 3.1 临床收集病例结果24-26
• 3.2 细胞试验部分26-37
• 第4章 结论37-41
• 4.1 Hcy的存在新式与代谢37
• 4.2 Hcy与放颤的关系37-38
• 4.3 Hcy致心房颤的可能机制38-41
• 第5章 结论41-42
• 第6章 不足之处42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-47
• 攻读学位期间的研究成果47-48
• 综述48-53
• 参考文献51-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1086902