PH-LHD循环标志物的变化及其参与肺血管重构的机制

发布时间：2017-10-24 04:28

  本文关键词：PH-LHD循环标志物的变化及其参与肺血管重构的机制

  更多相关文章： 左心疾病 肺高压 生化标志物 microRNA 血管重构

【摘要】：研究背景:肺高压(pulmonary hypertension,PH)是左心疾病(left heart disease,LHD)常见的并发症,而LHD也是造成PH最常见的病因。现行欧洲、美国及我国PH指南把左心疾病相关肺高压(pulmonary hypertension due to left heart disease,PH-LHD)列为PH第二大类。肺血管收缩及肺血管重构是PH形成后得以维持并迅速进展的病理生理基础,但其机制及治疗方案均不是很明确。PH-LHD的形成机制可能与第一大类肺动脉高压并不相同,因此,需要进一步深入研究PH-LHD的病理生理机制,为逆转PH进展和临床治疗提供新的依据。在LHD患者中,PH起病隐匿,其症状如呼吸困难、乏力、胸痛等均不典型,往往被临床忽视。心脏超声在评估肺动脉收缩压(pulmonary artery systolic pressure,PASP)时相对误差较大,而右心导管属于有创检查,在临床应用中也具有局限性。因此,临床上需要进一步研究PH简便易行的检测和评估方法。近年来,生化标志物逐渐被广泛应用,生物标志物能够反映正常生物学过程和病理状态。传统的PH相关的标志物,包括脑钠肽(BNP)、胆红素、红细胞分布宽度、尿酸、肌酐、胱抑素C和高密度脂蛋白等,虽缺乏特异性,但易于检测。新近发现,microRNA在疾病中发生表达水平变化,参与疾病的病理机制,而且microRNA在血清或血浆中稳定存在,可以被检测,有望成为新的生化标志物。但LHD导致PH时,循环标志物的变化目前尚不清楚。研究目的:1.探讨预测PH-LHD的敏感普通生化标志物。2.利用microRNA芯片对合并和不合并PH的LHD患者的血清样本,筛选出循环microRNA的差异表达谱,找出有预测PH意义的microRNA。3.利用主动脉弓缩窄的方法建立左心超负荷小鼠模型,观察筛选microRNA表达变化,探讨其与肺血管重构的关系。4.探讨人肺动脉内皮细胞miR-206对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及与Notch3信号的关系。研究方法:1.2014年1月至2015年5月在第三军医大学附属新桥医院住院的lhd患者共计353例,所有患者均行心脏超声检测评估pasp,参照2009年欧洲ph指南以pasp≥50mmhg作为诊断ph的依据,其中有lhd但不合并ph的患者216例(lhd对照组),lhd合并ph的患者137例(ph-lhd组)。另设年龄、性别匹配的健康对照64例(健康对照组)。分析普通生化标志物预测ph-lhd的价值。2.2014年6月至2015年5月在第三军医大学附属新桥医院住院的lhd患者共计82例,所有患者均行心脏超声检测评估pasp,参照2009年欧洲ph指南以pasp≥50mmhg作为诊断ph的依据,其中有lhd但不合并ph的患者47例(lhd对照组),lhd合并ph的患者35例(ph-lhd组)。另设年龄、性别匹配的健康对照17例(健康对照组)。另随机选2例lhd患者和2例ph-lhd患者采集血清样本行microrna芯片分析。所有受试者采集血清样本,用qrt-pcr技术检测血清microrna水平,分析microrna预测ph-lhd的准确性。3.建立主动脉弓缩窄(tac)及假手术(sham)小鼠模型(每组n=6),肺组织he染色观察小动脉结构变化,检测肺组织jagged2、notch3和mir-206的水平变化。4.对人肺动脉内皮细胞转染mir-206mimics和mir-206inhibitors,检测jagged2水平变化。建立jagged2稳定过表达人肺动脉内皮细胞系,以及利用sirna干扰技术使人肺动脉内皮细胞jagged2表达下调,检测mir-206水平变化。利用内皮细胞和平滑肌细胞的共培养技术,观察人肺动脉内皮细胞mir-206和jagged2对人肺动脉平滑肌细胞notch3表达和增殖活性的影响。结果:1.与健康对照组及lhd对照组相比,ph-lhd组肺动脉以及心脏四室直径均显著增加,左室射血分数显著降低(p均0.001)。生化标志物中,与健康对照组及lhd对照组相比,ph-lhd组的脑钠肽(bnp)、总胆红素、直接胆红素(db)、间接胆红素、红细胞分布宽度(rdw)、尿酸和胱抑素c等水平均显著升高(p均0.001)并且与pasp呈正相关(p均0.001),高密度脂蛋白(hdl)水平显著降低(p0.001)且与pasp呈负相关(p0.001)。采用二元logistic正向逐步回归筛选出预测ph-lhd的联合标志物为bnp、db和rdw并获得其预测模型,roc分析表明预测模型曲线下面积(auc)为0.858(95%ci:0.819~0.897,p0.001),阈值为0.256时敏感度为0.822,特异度为0.783,较单独生化标志物预测价值高。2.芯片分析结果表明,PH-LHD患者外周血清中2个microRNA水平上调,16个microRNA水平下调。对mi R-206进一步验证,表明PH-LHD患者外周循环的mi R-206水平下调,与PASP呈负相关,与循环动脉血压无显著相关性,与左室射血分数呈正相关。ROC分析表明miR-206对PH-LHD有预测价值(AUC=0.734,95%CI:0.636~0.832,P0.001),且通过Logistic预测方法分析,联合miR-206、左心房舒张末期内径(LAD)和BNP的预测价值更高(AUC=0.911,95%CI:0.854~0.968,P0.001)。3.TAC组小鼠模型的右心室收缩压与Sham组相比差异无统计学意义(P0.05),但右心室等容收缩期压力上升的最大速率(max dP/dt)显著降低(P0.001),肺小动脉发生血管重构,肺组织Jagged2表达水平下调,Notch3表达水平上调,miR-206水平下调。4.人肺动脉内皮细胞miR-206可以抑制Jagged2的表达,并促进人肺动脉平滑肌细胞Notch3表达和细胞增殖活性。人肺动脉内皮细胞Jagged2可以促使miR-206表达,并抑制人肺动脉平滑肌细胞Notch3表达和细胞增殖活性。结论:LHD导致PH发生时,循环生化标志物水平和microRNA表达均发生显著改变,且与肺动脉收缩压具有相关性。血清miR-206水平降低与PH-LHD和心功能密切相关。mi R-206可能通过调节肺动脉内皮细胞Jagged2和肺动脉平滑肌细胞的Notch3信号参与肺血管重构。
【关键词】：左心疾病 肺高压 生化标志物 microRNA 血管重构
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 PH-LHD患者外周静脉血生化标志物的特征及预测肺高压的价值16-30
• 2.1 引言16
• 2.2 研究对象及材料16-17
• 2.3 方法17-18
• 2.4 结果18-26
• 2.5 讨论26-30
• 第三章 PH-LHD患者血清microRNA的变化及预测肺高压的价值30-47
• 3.1 引言30
• 3.2 研究对象及材料30-32
• 3.3 方法32-35
• 3.4 结果35-44
• 3.5 讨论44-47
• 第四章 血管内皮miR-206 调节人肺动脉平滑肌细胞增殖的作用和机制47-73
• 4.1 引言47-48
• 4.2 材料48-53
• 4.3 方法53-63
• 4.4 结果63-70
• 4.5 讨论70-73
• 全文结论73-74
• 本研究的创新之处74-75
• 本研究的局限性75-76
• 参考文献76-82
• 文献综述 PH-LHD的发病机制82-95
• 参考文献89-95
• 附录 融解曲线95-96
• 攻读学位期间的研究成果96-97
• 致谢97

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本文编号：1087045