p300和MRTF-A协同促进内皮细胞VE-cadherin表达的研究

发布时间：2017-11-01 17:04

  本文关键词：p300和MRTF-A协同促进内皮细胞VE-cadherin表达的研究

  更多相关文章： MRTF-A p300 HUVEC 转录调控

【摘要】：血管生成在机体生长发育和肿瘤发生发展等过程中具有重要作用。VE-cadherin是维持血管内皮细胞完整性的关键基因,对血管发育和血管生成至关重要。然而目前对于VE-cadherin的调控机制尚不清楚。MRTF-A作为一种重要的转录因子,在许多心血管疾病的发生发展以及血管分化发育过程中,对多个标志性基因发挥着重要的转录调控作用。本论文主要探究了MRTF-A及组蛋白乙酰化转移酶p300对VE-cadherin基因的控制作用及作用机制。本文首先利用小干扰RNA特异性抑制了人源的血管静脉内皮细胞(HUVEC)中内源性MRTF-A的表达,利用matrigel实验证实干扰MRTF-A的表达会抑制HUVEC形成血管样结构。进一步利用Real-time PCR和western blot检测发现：作为维持内皮细胞功能的VE-cadherin的表达也受到抑制。VEGF是内皮细胞生长和血管生成所必须的重要生长因子。在干扰MRTF-A表达的同时加入VEGF,这种抑制作用表现的更为明显。上述结果提示MRTF-A可能通过靶标VE-cadherin调控HUVEC成血管。通过对VE-cadherin启动子的序列分析发现其上有MRTF-A的结合位点CArG盒。为证明MRTF-A是否可以调控VE-cadherin基因的转录,构建了含CArG盒的VE-cadherin启动子质粒,通过荧光素酶报告分析检测发现MRTF-A对VE-cadherin启动子有明显的转录作用,并且这种转录激活作用具有浓度依赖性。将MRTF-A的结合位点CArG盒突变之后,这种转录激活作用显著降低。同时,染色质免疫共沉淀(ChIP)检测发现：MRTF-A能够结合在VE-cadherin启动子上的CArG盒上,并且结合作用对VEGF诱导浓度有着明显的浓度依赖性。上述结果证明了VE-cadherin可以作为MRTF-A的下游靶基因。之前有研究结果显示VEGF的刺激可以促使招募组蛋白乙酰化转移酶p300,p300能诱使染色质结构重塑,从而激活基因转录。在HUVEC中分别单独转染MRTF-A和p300以及共同转染MRTF-A和p300,结果发现MRTF-A和p300能够明显协同促进VE-cadherin的转录与表达。ChIP结果显示当共同转染了MRTF-A和p300之后,MRTF-A与VE-cadherin启动子上的CArG盒的结合作用明显增加。同时,我们还发现MRTF-A可以招募p300,从而增强SRF结合位点附近的组蛋白H3K9, H3K14和H4上的乙酰化程度,从而有利于MRTF-A对VE-cadherin基因的转录调控作用。
【关键词】：MRTF-A p300 HUVEC 转录调控
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-22
• 1.1 血管生成9-11
• 1.2 血管生成的调控11-12
• 1.3 血管内皮细胞钙黏蛋白VE-cadherin12-14
• 1.3.1 VE-cadherin的发现12-13
• 1.3.2 VE-cadherin结构及其特征13
• 1.3.3 VE-cadherin在血管中的调节作用13-14
• 1.4 Myocardin家族相关转录因子(MRTFs)14-17
• 1.4.1 Myocardin的发现14
• 1.4.2 MRTFs的结构特点14-16
• 1.4.3 MRTFs在内皮分化中的作用16-17
• 1.5 组蛋白乙酰化转移酶(HATs)p300与MRTFs的关系17-20
• 1.5.1 表观遗传学17-18
• 1.5.2 组蛋白乙酰化在转录过程中的作用18-19
• 1.5.3 组蛋白乙酰化转移酶：p30019-20
• 1.5.4 p300在MRTFs转录调控中起到的作用20
• 1.6 研究的目的及意义20-21
• 1.7 研究的主要内容21-22
• 2 材料与方法22-47
• 2.1 实验材料22-30
• 2.1.1 材料与试剂22-24
• 2.1.2 常用溶液的配置24-29
• 2.1.3 实验仪器29-30
• 2.2 实验方法30-47
• 2.2.1 细胞培养30-31
• 2.2.2 细胞的转染31-32
• 2.2.3 RNA提取、逆转录和实时定量PCR32-35
• 2.2.4 蛋白免疫印记(Western blot)35-36
• 2.2.5 荧光素酶报告基因分析(Luciferase reporter assay)36-37
• 2.2.6 VE-cadherin启动子的构建37-41
• 2.2.7 点突变质粒的构建41-43
• 2.2.8 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)43-46
• 2.2.9 数据统计46-47
• 3 结果与讨论47-64
• 3.1 在HUVEC中,MRTF-A对VE-cadherin转录表达及功能作用分析47-50
• 3.1.1 在HUVEC中,MRTF-A对成血管的影响分析47
• 3.1.2 在HUVEC中,MRTF-A对VE-cadherin的表达的作用影响47-50
• 3.2 MRTF-A对VE-cadherin启动子转录活性的影响50-55
• 3.2.1 VE-cadheirn野生型荧光素酶报告质粒的构建及活性分析50-52
• 3.2.2 MRTF-A促进VE-cadherin启动子转录活性的作用分析52-55
• 3.3 MRTF-A和p300能够协同增强VE-cadherin的转录活性和蛋白表达55-58
• 3.3.1 MRTF-A和p300协同促进VE-cadherin的转录和表达55-57
• 3.3.2 MRTF-A与TSA协同促进VE-cadherin的转录和表达57-58
• 3.4 过表达p300影响MRTF-A与VE-cadherin启动子结合的研究分析58-60
• 3.4.1 MRTF-A和MRTF-A协同促进VE-cadherin启动子的转录活性58-59
• 3.4.2 MRTF-A和p300协同促进VE-cadherin转录激活的结合元件分析59-60
• 3.5 MRTF-A和p300通过对H3K9、H3K141和H4的乙酰化作用对VE-cadherin调控转录的分析60-62
• 3.6 讨论62-64
• 4 结论64-65
• 5 展望65-66
• 6 参考文献66-72
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况72-73
• 8 致谢73

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4 ;E－Cadherin在膀胱乳头状移行细胞癌的表达[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1996年02期

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6 ;The expression of N-cadherin/catenins/actin complex in human lung normal and carcinoma cells[J];Chinese Science Bulletin;1998年09期

7 ;Quantitative analysis of E-cadherin expression and clinicopathologic evaluation in gastric cancer[J];Chinese Medical Journal;1998年01期

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4 ;Suppressed survival and proliferation of ovarian cancer cells by repressed MEK-ERK activation via knocking-down of E-cadherin[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年

5 ;N-cadherin:a potential receptor of GDNF[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

6 Zhiyang Xu;Dechang Li;Baohua Ji;;Quantification of the stiffness and strength of cadherin ectodomain binding with different ions[A];北京力学会第20届学术年会论文集[C];2014年

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9 ;Manipulation of N-cadherin level and function through different methods results in distinct functional changes in hippocampal neurons[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年

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