小鼠酒精性心肌病相关microRNA表达谱分析

发布时间：2017-11-16 12:21

  本文关键词：小鼠酒精性心肌病相关microRNA表达谱分析

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【摘要】：酒精性心肌病是由于长期过量饮酒所导致的慢性心功能障碍,并逐步发展为扩张型心肌病,目前发病率逐年增长,社会危害严重,而人们对参与酒精性心肌病发展的microRNA的作用机制和方式等还不清楚。因此,在本研究中,我们将通过基因芯片分析1microRNA在正常和酒精性心肌中的表达谱变化,结合生物信息学预测,寻找和明确microRNA参与酒精性心肌病变的线索；利用microRNA分子生物学研究方法,初确认microRNA对小鼠心肌的调控作用,为阐明microRNA在心脏发育、心肌肥厚、心律失常、心肌纤维化及心肌细胞凋亡和心力衰竭等心脏生理和病理生理过程中的功能作用提供新的理论依据,为将来心血管疾病防治提供新的思路和治疗策略。 研究目的 (1)通过饲喂酒精的方法建立小鼠酒精性心肌病模型； (2)利用microRNA芯片筛选小鼠酒精性心肌病病变相关microRNA,以期发现酒精性心肌病心肌病变的分子基础； (3)应用Real-Time PCR技术对差异表达的microRNA进行分子生物学验证； 研究方法 50只雄性昆明种小鼠,重量15-20g,随机分为对照组(n=20)和酒精性心肌病实验组(n=30)。所有动物由昆明医科大学动物实验中心提供。实验组小鼠经每日饮用4%乙醇12周制作酒精性心肌病模型,对照组则每日饮用等量生理盐水。通过上述方法建立小鼠酒精性心肌病模型,模型成功建立后取出小鼠心脏,做病理切片并送病检,HE染色后光学显微镜观察心肌细胞形态学改变；在第12周确认模型建立成功后取小鼠心脏组织,用Trizol法提取心肌组织总RNA,采用基因芯片技术检测1miRNA的表达,利用GenePix Pro6.0软件分析、并挑选差异表达的miRNA,然后应用miRNA荧光定量PCR试剂盒证实该种特异性表达的1miRNA确实在酒精性心肌病心肌组织中有差异性表达变化,并且对该差异性表达的1niRNA进行相对定量分析。 研究结果 (1)与对照组相比,解剖发现,实验组小鼠左心室、室间隔增厚显著,实验组心脏未见明显大于正常组。病理结果显示,实验组心肌细胞增大、部分心肌细胞水肿并且细胞排列不整齐： (2) miRNA芯片结果分析发现,mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3在酒精性心肌病的实验组表达量明显高于对照组,实时荧光定量PCR也证实mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3等在酒精性心肌病的实验组表达量明显高于对照组,与芯片结果一致；而芯片结果与实时荧光定量PCR都显示mmu-miR-X5, mmu-miR-X6, mmu-miR-X7, mmu-miR-X8, mmu-miR-X9, mmu-miR-X10, mmu-miR-X11, mmu-miR-X12在实验组心肌表达下降。 结论 (1)酒精性心肌病小鼠心肌组织与正常的心肌组织相比,miRNA存在差异性表达； (2)小鼠酒精性心肌病心肌组织病变相关miRNA有mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3, mmu-miR-X5, mmu-miR-X6, mmu-miR-X7, mmu-miR-X8, mmu-miR-X9, mmu-miR-X10, mmu-miR-X11, mmu-miR-X12。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R542.2

【共引文献】

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本文编号：1192342