携IL-8单克隆抗体的超声造影剂对心肌梗死细胞的靶向性研究

发布时间：2017-11-26 08:18

  本文关键词：携IL-8单克隆抗体的超声造影剂对心肌梗死细胞的靶向性研究

  更多相关文章： IL-8单克隆抗体 超声造影剂 偶联 心肌梗死 寻靶 损伤心肌细胞

【摘要】：目的：建立兔心肌梗死模型检测血清及梗死心肌组织中IL-8的表达并制备携IL-8单克隆抗体靶向超声造影剂,在此基础上通过体外寻靶实验评价该造影剂的靶向粘附效能,并探讨IL-8在心肌梗死早期所起的作用,为临床早期诊断和治疗急性心肌梗死提供新的影像学依据奠定了基础。方法：1.兔心肌梗死模型的建立：选取30只成年日本大耳兔(雌雄不限),体重2.5-3.0kg,将兔随机分成2组,处理方式如下：A组为心梗组,结扎兔冠状动脉前降支,B组为假手术组,缝线只穿过心肌但不结扎。术中全程心电监护,记录术前、术中及术后两组兔心电图的改变情况；术后6h及一周常规超声心动图检查,记录室壁运动情况；两组兔均于术前及术后0.5h及6h留取静脉血离心后检测IL-8的浓度实验结束后取出兔心脏行病理学检查,为进一步确定兔急性心肌梗死提供依据。2.损伤心肌组织中IL-8表达的监测：兔心肌梗死模型建立成功,取A组兔(心梗组)及B组兔(假手术组)心肌细胞病理蜡块,行免疫组化染色,验证心肌梗死细胞IL-8表达水平。3.靶向声学造影剂的制备及鉴定：采用共价偶联法通过SPDP交联剂将IL-8单克隆抗体偶联于SonoVue微泡表面,显微镜下观察微泡大小、形态及分散度并通过玻片凝集实验及荧光染色实验证明偶联是否成功。4.心肌细胞的培养及损伤：采用DMEM+10%FBS培养基将大鼠心肌细胞H9C2培养至细胞融合度达到90%以上时传代,将细胞移入4个35mm的培养皿中,分为两组,按以下方式处理：一组为对照组,标记为a、b加入高糖培养基；一组为实验组标记为c、d加入低糖培养基。将实验组放入无氧的纯氮气袋中,6h后倒置显微镜下对两组心肌细胞行形态学观察。5.自制携IL-8单克隆抗体靶向超声造影剂与心肌细胞作用：在对照组与实验组中分别加入自制的靶向声学微泡悬液与对照组未偶联微泡悬液,分为4组,倒置显微镜下观察四个培养皿中心肌细胞对自制靶向声学造影剂的聚集作用。高倍视野下计数心肌细胞及粘附微泡数目,通过计算微泡与心肌细胞的比值对两者之间的结合作用进行定量分析。结果：1.兔心肌梗死模型建立：术前观察两组兔二维超声、心电图均无异常。①心电图检测：A组兔心率稍有增快,ST段抬高；B组兔心率稍增快,ST段未见变化；②A组兔二维超声观察室壁运动幅度较术前及假手术组均减低。B组兔假手术组室壁运动与术前相比未见异常；③血清学检测显示A组兔血清中IL-8浓度明显高于其术前及B组兔(P0.05),且随着损伤时间的延长IL-8的浓度逐渐增高；B组兔术前及术后血清中IL-8的浓度未见明显变化；④病理结果显示：A组兔前降支所供血区域的心肌组织发生了心肌梗死,B组兔未见心肌梗死细胞。2.免疫组化染色实验对IL-8的检测显示①A组兔损伤心肌细胞免疫组化染色显示损伤心肌细胞细胞核呈紫蓝色,而细胞表面着棕色；②B组兔正常心肌细胞免疫组化染色显示心肌细胞细胞核同样呈紫蓝色,但是细胞表面未见着色。3.未偶联的普通SonoVue微泡分布均匀,大小均一,散在分布。偶联后的IL-8单克隆抗体微泡悬液及对照组SonoVue微泡的浓度均随时间的延长而稍减低,但与未偶联微泡相比大小、形态及性状基本无明显变化。4.(1)玻片凝集实验：自制靶向声学微泡悬液与二抗混合,倒置显微镜下观察两者可发生凝集反应；对照组未偶联微泡悬液与二抗混合,倒置显微镜下观察未见凝集。两种造影剂与冰醋酸混合后倒置显微镜下观察均未发生凝集反应。(2)免疫荧光染色实验：自制靶向声学微泡悬液表面可见荧光显现,而对照组未偶联造影剂微泡表面未显现荧光。5.心肌细胞的培养及损伤倒置显微镜下观察：正常心肌细胞生长状态良好,细胞饱满,形态多样(圆形、梭形及锥形),周围可见光晕,且折光性强；损伤心肌细胞,细胞皱缩,部分细胞膜破裂,胞浆颗粒增加,细胞间偶联破坏,足突消失,折光性下降。6.倒置显微镜下观察声学微泡与心肌细胞相互作用：自制靶向声学微泡悬液与损伤心肌细胞及损伤初期变形心肌细胞的粘附作用明显高于对照组(P0.05)；同时自制靶向声学微泡悬液与损伤心肌细胞及损伤初期变形心肌细胞的粘附作用明显高于与正常心肌细胞的作用(P0.05),且随着损伤程度的增加,微泡粘附数量逐渐增多。结论：1.通过结扎兔左冠状动脉前降支,成功制备兔心肌梗死模型,为下一步进行免疫组化实验提供动物模型。2.血清学监测显示：在心肌梗死初期血清中便可测得IL-8,且随着损伤的加重IL-8分泌逐渐增多,IL-8又可趋化中性粒细胞加重炎症反应,IL-8在血清中呈高表达。3.免疫组化病理切片染色显示损伤心肌组织表面IL-8呈高表达,故我们选择IL-8单克隆抗体作为靶向抗体,将其偶联到SonoVue微泡表面能够为早期检测出心肌梗死细胞提供新的方法。4.玻片凝集实验及免疫荧光染色证实IL-8单克隆抗体已成功偶联到SonoVue微泡表面,偶联后的微泡与未偶联的微泡浓度、大小、形态、性状基本相似,说明了通过共价偶联法制备的声学造影剂其物理及生物性状未见明显变化,故可以作为声学造影剂作用于生物体内。5.利用使心肌细胞缺氧、缺糖的方法损伤心肌细胞,诱导心肌细胞分泌大量IL-8,为体外细胞实验提供了实验模型。6.体外寻靶实验可见自制靶向声学微泡粘大量附于损伤心肌细胞表面,说明IL-8单克隆抗体共价偶联到SonoVue微泡表面后仍具有免疫活性。7.体外寻靶细胞实验显示可见部分未偶联SonoVue微泡粘附于损伤心肌细胞表面,但其结合作用明显低于自制靶向声学微泡悬液,说明携IL-8单克隆抗体的靶向超声造影剂微泡对靶细胞的结合具有高效性及特异性等优点。8.体外寻靶细胞实验通过利用携IL-8单克隆抗体靶向微泡与损伤心肌细胞表面的特异性抗原抗体反应,证明了心肌梗死早期即可产生IL-8,可随着损伤的加重IL-8呈高表达,IL-8单抗可以特异性地结合IL-8,对减轻心梗的发展有一定作用,因此成功制备携带IL-8单克隆抗体的靶向声学造影剂对早期诊断心肌梗死有较高价值。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R445.1;R542.22

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 蔡明清;心肌细胞再生和腔室重塑[J];中国分子心脏病学杂志;2002年01期

2 李娜;;心肌细胞可以再生[J];科技导报;2009年08期

3 薛惠文;章静波;;人类心肌细胞的更新[J];基础医学与临床;2009年07期

4 崔晓兵;;人类成年心肌细胞可以更新[J];生理科学进展;2010年06期

5 苏倩文;;心肌细胞可以再生[J];心血管病防治知识(科普版);2013年05期

6 周亮 ,曾晓荣,杨艳,刘智飞,李妙龄,裴杰;豚鼠心肌细胞急性酶分离方法[J];四川生理科学杂志;2000年02期

7 万朝敏,俞红吉,吴泰相,高云钦,周密,邓建军,王正荣;免疫损伤对离体培养心肌细胞力学特性的影响[J];中国医学物理学杂志;2000年02期

8 贾士东,修瑞娟;心肌细胞功能的研究[J];中国微循环;2000年03期

9 何作云,刘健;心肌细胞核钙信号的研究[J];重庆医学;2002年02期

10 张家平;丝裂素活化蛋白激酶与心肌细胞效应[J];重庆医学;2002年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张保国;赵萍;张文杰;;钼对培养心肌细胞存活的影响[A];中国营养学会首届微量元素专题讨论会论文摘要汇编[C];1985年

2 房亚东;黄跃生;党永明;张家平;张东霞;宋华培;张琼;;上调微管相关蛋白4对缺氧早期心肌细胞活力影响的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

3 唐陶;王世骐;庄茁;;基底应变对心肌细胞的影响[A];北京力学会第14届学术年会论文集[C];2008年

4 何作云;刘健;王培勇;;心肌细胞核钙信号的研究[A];21世纪医学工程学术研讨会论文摘要汇编[C];2001年

5 何作云;刘健;;心肌细胞核钙信号的研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

6 滕苗;黄跃生;党永明;房亚东;张琼;;微管干预剂对缺氧心肌细胞糖酵解途径关键酶的影响[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年

7 宋新爱;林元喜;樊小力;;心肌细胞的纯化[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

8 刘兴茂;陈昭烈;刘红;熊福银;;心肌细胞体外三维培养的初步研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年

9 熊江辉;李莹辉;聂捷琳;张晓铀;丁柏;;槲皮素对回转条件下心肌细胞—氧化氮合成的影响[A];中国宇航学会航天医学工程专业委员会、中国空间科学学会空间生命专业委员会联合学术研讨会论文摘要集[C];2001年

10 阳冬梅;吴才宏;程和平;;钙调蛋白对心肌细胞兴奋—收缩耦联的调节作用[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 刘黎;荷兰培育心肌细胞取得进展[N];中国中医药报;2008年

2 编译 晓鱼;人类心肌细胞可再生[N];医药经济报;2009年

3 孙国根;心肌细胞的形成和再生有望被诱导[N];中国医药报;2012年

4 吴伟农;心肌细胞能自我修复[N];医药经济报;2001年

5 陈丹;移植的人体细胞可与豚鼠受体心肌同步跳动[N];科技日报;2012年

6 记者胡德荣;心肌细胞能体外培养[N];健康报;2002年

7 杨洋;骨髓细胞生成心肌细胞[N];卫生与生活报;2003年

8 吴理茂 李连达;中药在心肌细胞移植中的作用[N];中国医药报;2003年

9 ;急性心梗治疗获重要突破 心肌细胞可以再生[N];中国保险报;2003年

10 记者 张晔;基因调控让坏死的心肌细胞“复活”[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 吴东栋;硫化氢提高Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性的作用及其机制研究[D];复旦大学;2013年

2 徐磊;MMI-0100通过对心肌细胞及成纤维细胞中MK2的抑制作用降低心肌纤维化程度的研究[D];山东大学;2015年

3 牟永潮;基于纳米材料再造心肌组织生物学评价与心梗治疗研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

4 李娜;PDE5抑制剂Sildenafi1对心梗后心衰线粒体能量代谢保护及机制研究[D];第四军医大学;2015年

5 陈亮;miR-199a对大鼠心肌细胞自噬的调控研究[D];第二军医大学;2015年

6 王晓丽;附子人参配伍对大鼠心肌细胞保护作用的研究[D];长春中医药大学;2015年

7 肖剑锋;碘化-N-正丁基氟哌啶醇对缺氧心肌细胞钙稳态的保护作用[D];汕头大学;2011年

8 张翠翠;MG53调节心脏辅助亚基KChIP2表达的分子机制及在心电稳态调节中的作用[D];南方医科大学;2014年

9 张海彬;miR-711在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制[D];吉林大学;2016年

10 位庚;心肌微血管内皮细胞损伤对心肌细胞的影响及通络干预研究[D];河北医科大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 付丽;硫化氢后处理对大鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及机制研究[D];遵义医学院;2015年

2 黄玉洁;miR-218调控小鼠胚胎干细胞体外定向分化心肌细胞研究[D];浙江大学;2015年

3 李品雅;华蟾毒精对心肌细胞L型钙电流，，钙瞬变和收缩力的影响[D];河北医科大学;2015年

4 刘洋;野蔷薇苷对H_2O_2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究[D];河北医科大学;2015年

5 朱燕梅;银杏叶提取物保护心肌细胞抗氧化损伤及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用机制[D];成都医学院;2015年

6 刘莉;心肌细胞TLR4促进心梗后心脏炎症反应的研究[D];宁夏医科大学;2015年

7 卢杏;体外转染CyclinA2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响[D];新乡医学院;2015年

8 窦梦怡;缺氧时心肌细胞自噬的变化及其机理的研究[D];山西医科大学;2015年

9 兰晓东;微管解聚对心肌细胞电生理特性的影响及微管定量分析方法研究[D];第三军医大学;2015年

10 李熠;TGR5在高糖诱导小鼠心肌细胞凋亡中的作用及其机制[D];四川医科大学;2015年

本文编号：1229156