尼可地尔预处理对大鼠心肌缺血再灌注氧化应激及炎性因子影响的研究

发布时间：2018-01-10 11:00

本文关键词：尼可地尔预处理对大鼠心肌缺血再灌注氧化应激及炎性因子影响的研究　出处：《河北医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:心肌缺血(myocardial ischemia,MI)是一种病理状态,由于冠状动脉狭窄等原因,心脏的血液灌注减少,进而心肌出现供血供氧的不足及代谢产物的清除减少。当前尽快地恢复缺血区心肌的血液供应,达到心肌再灌注治疗是我们普遍采取的主要方法。但再灌注在改善缺血缺氧、拯救濒死心肌的同时,还可出现心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)。而探索MIRI的机制和寻求避免或减轻MIRI的方法已然成为了心血管研究领域的热点问题。ATP敏感性钾离子通道(ATP-sensitive potassium channel,KATPC)开放剂,在防治MIRI研究中具有较好的心脏保护功能。本研究通过建立大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)的动物模型,选用代表性的心脏非选择性KATPC开放剂尼可地尔,于术前进行干预,观察尼可地尔是否存在减轻再灌注损伤的作用,并探讨其抗氧化应激、减轻炎症反应的变化,为其在防治MIRI的临床应用上提供新的理论依据和治疗思路。方法:选取健康的成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠48只,随机分为3组(每组16只):(1)假手术组(Sham组)、(2)缺血再灌注组(I/R组)、(3)尼可地尔组(Nic组)。适应性喂养大鼠3天后,Nic组给予尼可地尔(生产厂家:北京四环科宝制药有限公司)1mg/(kg.d),经尾静脉注射给药,每间隔24小时重复给药一次,连续1周;Sham组、I/R组则给予等量生理盐水尾静脉注射,每间隔24小时重复给生理盐水一次,连续1周。第八日手术,术前半小时Nic组再次追加一天剂量药物,Sham组、I/R组则给等量的生理盐水,手术时,Sham组开胸后行左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)下穿线,不进行结扎;I/R组、Nic组行心脏结扎LAD30分钟,而后再松解120分钟再灌注操作。制作I/R模型成功的标准:缺血时左心室前壁的颜色变深(呈紫红色或是蓝紫色),II导联同步心电图显示ST段抬高≥0.2m V或T波直立,QRS波群增宽或幅度增高;松解结扎线后冠脉血流恢复,缺血区心肌颜色恢复,高耸T波快速回落、抬高的ST段回降50%以上。术后各组取血,检测血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB),酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA))法测肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6),黄嘌呤氧化酶法测心肌总超氧化物岐化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性,硫代巴比妥酸(thiobarbimric acid,TBA)法测心肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;双染色法(2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)与伊文氏蓝(Evans blue))测心肌梗死面积,肉眼可观察梗死区域心肌是灰白色,缺血区域心肌是浅红色,正常区域心肌是蓝色。梗死面积表示为AN/AR,即总梗死区面积(area of necrosis,AN)/总危险区面积(area at risk,AR,为梗死区同缺血区面积总和)(AN/AR),危险区面积表示为AR/ALV,即危险区面积/左室面积(area of left ventricle,ALV),应用计算机的分析软件系统分析各组AN/AR和AR/ALV。应用SPSS 13.0软件对各组数据进行统计分析,计量资料统计指标通过检验符合正态性及方差齐性,则以均数±标准差(x_±s)表示,两组之间的比较采用成组t检验,多组间比较采用完全随机设计资料的单因素方差分析(one-way ANOVA)、秩和检验(Kruskal-WAllis H),两两之间比较则采用LSD法分析,检验水准设置为α=0.05。结果:1心电图II导联变化:本实验各组术前大鼠的心电图为正常心电图。Sham组心电图未见明显变化;I/R组、Nic组成功行大鼠LAD结扎,显示QRS波群宽大畸形,ST段弓背状抬高≥0.2m V,T波上抬;复灌时,T波迅速回落、ST段下降大于50%,I/R组1只大鼠发生室颤死亡,Nic组1只发生了短暂室速,I/R组有5只、Nic组有3只出现了房室传导阻滞,部分遗留病理性Q波。2 CK-MB的比较:Sham组、I/R组、Nic组的CK-MB分别为:(19.69±4.55)IU/L、(83.52±6.63)IU/L、(75.76±5.25)IU/L,同Sham组相比,I/R组、Nic组的血清中CK-MB升高(P0.01),差异有统计学意义;Nic组CK-MB升高但程度较I/R组低(P0.05),差异有统计学意义。3 TNF-α的比较:Sham组、I/R组、Nic组的TNF-α分别为:(28.92±15.72)pg/ml、(180.56±22.97)pg/ml、(122.18±19.49)pg/ml,同Sham组相比,I/R组、Nic组血清TNF-α升高(P0.01),差异有统计学意义;I/R组TNF-α升高较Nic组更明显(P0.01),二者相比差异有统计学意义。4 IL-6的比较:三组的IL-6分别为:(63.20±7.90)pg/ml、(164.44±9.29)pg/ml、(120.64±8.11)pg/ml,同Sham组相比,I/R组、Nic组IL-6含量显著升高(P0.01),差异有统计学意义;I/R组IL-6升高较Nic组更明显(P0.01),二者相比差异有统计学意义。5 T-SOD的比较:三组的T-SOD分别为:(134.50±8.04)U/mgprot、(94.45±6.71)U/mgprot、(112.27±5.17)U/mgprot,同Sham组相比,I/R组、Nic组T-SOD含量有所下降(P0.01),差异有统计学意义;I/R组T-SOD下降程度较Nic组更为明显(P0.01),二者相比差异有统计学意义。6 MDA的比较:三组的MDA分别为:(2.18±0.52)nmol/mgprot、(5.47±0.38)nmol/mgprot、(3.80±0.52)nmol/mgprot,同Sham组相比,I/R组、Nic组MDA含量升高(P0.01),差异有统计学意义;I/R组MDA升高较Nic组明显(P0.05),二者相比差异有统计学意义。7心肌梗死的面积比较:I/R组、Nic组危险区面积(AR/ALV)分别为:(37.77±4.42)%、(37.09±3.36)%,二者差异无统计学意义(P0.05),两组心肌缺血的危险程度相近。I/R组、Nic组梗死面积(AN/AR)分别为:(66.52±6.55)%、(48.64±7.86)%,同I/R组相比,Nic组梗死面积减少(P0.01),差异具有统计学意义。结论:1尼可地尔预处理能够有效地清除大鼠MIRI时的氧自由基,抗脂质过氧化,降低MDA含量、升高T-SOD水平,增强机体的抗氧化应激能力,保护心肌。2尼可地尔预处理能够抑制大鼠MIRI的炎症反应,降低炎性因子TNF-α、IL-6的生成与释放,减轻机体的炎性损伤,保护心肌。3尼可地尔预处理能够降低大鼠MIRI时的心肌酶CK-MB的升高幅度,减小心肌梗死面积。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2

【参考文献】