血管紧张素Ⅱ对房颤患者心房肌小电导钙激活钾通道的作用和机制研究

发布时间：2018-02-02 18:43

  本文关键词： 心房颤动 人心房肌细胞 血管紧张Ⅱ 小电导钙激活钾通道 膜片钳技术　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:临床常见的快速性房性心律失常——心房颤动(atrial fibrillation,AF),可并发于各种心脏病,能引起心功能不良、心室律(率)紊乱、血栓形成。严重者导致肺栓塞、脑动脉栓塞,卒中发病率、病死率上升。房颤的发病机制极为复杂,导致其治疗效果欠佳。弄清房颤的发病机制,将为房颤的治疗提供有力的理论依据。心房电重构是AF的重要发病机制,表现为:心肌细胞动作电位时程缩短,对频率顺应性降低。心肌细胞的动作电位时程由膜上各种离子通道活动决定,因而离子通道成为预防和治疗AF的潜在理想靶点。小电导钙激活钾通道(Small Conductance Ca~(2+)-activated K~+channels,SK)在心肌细胞上广泛表达,心房表达明显高于心室。该通道对膜电位改变不敏感,但对钙浓度的改变高度敏感。目前研究证实肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性的增强与AF密切关联。抑制内源性的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的作用可防止犬心房快速起搏导致的心房肌有效不应期的缩短,另有研究显示AngⅡ参与了多种离子通道的电重构过程,AngⅡ还可导致细胞钙超载。我们推测AngⅡ通过改变胞内钙浓度影响SK通道电流,从而参与AF的电重构。然而AngⅡ是否对SK通道有调节作用,及其可能的作用机制目前还不清楚。本实验采用实时定量PCR技术、免疫印迹技术(Western blotting)检测人心房肌AT1和AT2受体的基因和蛋白表达变化,采用全细胞膜片钳技术(Whole-cell patch clamp technique)记录sk通道,探寻af时sk通道电流的变化及angii对sk通道的调控作用机制,为目前房颤的治疗策略提供新的思路。方法:(一)电生理实验将10例(细胞总数n=16)手术患者的心肌组织按照心电图的结果和病历资料分为窦性心律组(sr)4例(细胞总数n=8)和心房颤动组(af)6例(细胞总数n=8)。改良的分离法得到单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录通道电流。观察指标(1)人心房肌细胞sk通道基本特点;(2)比较sr组和af组sk通道电流密度及其占混合电流的百分比;(3)angii对sr组和af组sk通道电流的作用。(二)实时荧光定量pcrsr组10例,af组10例。检测两组患者心房肌at1r、at2r基因mrna的表达水平。(三)免疫印迹技术sr组13例,af组13例。检测人心房肌at1r、at2r蛋白的表达变化。结果:(1)sk通道电流的特点人心房肌细胞sk通道电流内向整流,apamin能特异性阻断该通道。(2)比较两组sk通道电流在-130mv~-80mv钳制电压下,两组sk通道电流密度差别有统计学意义。在-130mv,sr组:(-2.17±0.16)pa/pf,af组:(-9.26±0.43)pa/pf(nsr=4,naf=3,p0.05);sk通道电流在混合电流中所占的比例sr组:(29.36±2.8)%,af组:(45.35±4.3)%(nsr=4,naf=3,p0.05)。结果显示,无论是sk通道电流密度还是在混合电流中所占的比例,af组都多于sr组。(3)angii对两组sk通道电流的作用1μmol/langii可减少两组sk通道电流密度及其在混合电流中的比例。在-130mv,angii对sk通道电流抑制比为sr组:(22.06±1.6)%,af组:(40.07±1.3)%(nsr=4,naf=5,p0.05),结果显示angii对sk电流的抑制作用af组大于sr组。(4)两组at1r,at2r基因mrna的变化sr组AT_1R 2~(-ΔΔCt)值:(0.75±0.28),AF组AT_1R 2~(-ΔΔCt)值(0.50±0.29)(nSR=5,nAF=5,p0.05)。表明AF组AT_1R基因mRNA水平变化无统计学差异;SR组AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(1.99±0.56),AF组AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(0.73±0.49)(nSR=5,nAF=5,p0.01)表明AF组AT2R基因mRNA水平明显下调。(5)两组AT1,AT2受体蛋白表达量的变化SR组的AT_1R蛋白表达量:(0.22±0.08),AF组的AT_1R蛋白表达量(0.13±0.10)(nSR=6,nAF=6,p0.05),表明AF时AT_1R蛋白表达水平无统计学差异;SR组的AT2R蛋白表达量:(0.51±0.12),AF组的AT2R蛋白表达量:(0.19±0.16)(nSR=7,nAF=7,p0.05),表明AF时AT2R蛋白表达水平下调。结论:(1)本实验记录到了SK通道电流,证实人心房肌细胞存在SK通道。(2)AF患者心房肌细胞内可能出现钙离子浓度增加,导致SK通道电流密度增加。(3)AF时,AngⅡ增加更易出现复极化末期膜电位震荡引发的心律失常。
[Abstract]:Objective : To study the effect of angiotensin 鈪，

本文编号：1485211