NO信号上调人肝细胞内源FⅧ的表达

发布时间：2018-03-27 08:40

  本文选题：FⅧ基因　切入点：组蛋白乙酰化　出处：《重庆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:通过对人永生化正常肝细胞LO2中凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,FⅧ)启动子区域组蛋白乙酰化和去乙酰化的研究,探索NO信号激活LO2细胞中FⅧ高表达的分子机制。方法:建立L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子FⅧ高表达的分子细胞模型。取对数生长期人类永生化肝细胞LO2随机分为:对照组和L-精氨酸组、组蛋白乙酰化抑制剂组和组蛋白去乙酰化抑制剂组。L-精氨酸组(L-精氨酸的终浓度10mM),对照组用同等体积的PBS取代L-精氨酸,组蛋白乙酰化抑制剂组(C646的终浓度25uM),组蛋白去乙酰化抑制剂组(SAHA的终浓度50nM),分别培养0h、12h、24h、36h、48h、60h。用RT-PCR方法检测各组中人FⅧ基因的转录水平。用染色质免疫共沉淀(ChIP)分别检测对照组,L-精氨酸组,组蛋白乙酰化抑制剂组,组蛋白去乙酰化抑制剂组FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平。构建核转录因子(Nuclear factor kB,NF-kB1)flag标签质粒,转染LO2细胞。用ChIP检测NF-kB1与FⅧ基因启动子区域转录因子结合位点的结合能力。结果:RT-PCR结果显示L-精氨酸组和组蛋白去乙酰化抑制剂组中FⅧ基因表达上调,正常组和组蛋白乙酰化抑制剂组中FⅧ基因为本底表达。ChIP检测到L-精氨酸组和组蛋白去乙酰化抑制剂组比正常组和组蛋白乙酰化抑制剂组中NF-kB1与FⅧ基因启动子区域转录因子结合位点的结合能力强,ChIP检测到对照组和组蛋白乙酰化抑制剂组FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平为本底表达,L-精氨酸组和组蛋白去乙酰化抑制剂组FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平提高。结论:上述研究表明组蛋白乙酰化抑制剂能取消LO2细胞中内源人FⅧ基因的上调,而组蛋白去乙酰化抑制剂能协同LO2细胞中内源人FⅧ基因的上调。NO信号在LO2细胞中通过调节FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平,招募转录因子NF-kB1上调人FⅧ基因的表达。
[Abstract]:Aim: to study the acetylation and deacetylation of the promoter region of factor 鈪，

本文编号：1670806