血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究

发布时间：2016-11-11 13:17

  本文关键词：血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《中南大学》 2014年

血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞血管生成的作用及机制研究

王香  

【摘要】：研究背景：心血管疾病是威胁人类健康的第一大杀手,而血管生成在心血管疾病的发生、发展过程中起着非常重要的作用。大量研究表明动脉粥样斑块内血管生成对动脉粥样硬化性疾病的进展和斑块的破裂起着非常重要的作用。有研究证实血管紧张素Ⅱ可促进动脉粥样斑块的形成和主动脉瘤的破裂；而在动脉粥样斑块区域和动脉瘤破口区,微血管富集；同时大量的研究亦表明血管紧张素Ⅱ能够诱导各型内皮细胞的增值、迁移及血管生成。但血管紧张素Ⅱ是如何促血管生成的呢,目前其作用机制仍不明确。 然而,近来有研究证实缺血、ox-LDL、血管紧张素Ⅱ等作为刺激因素均能诱发内质网的非折叠蛋白反应从而诱导内质网应激；在肿瘤和肾脏上皮细胞,非折叠蛋白反应尤其是IRE1信号通路介导血管生成,其主要通过上调VEGF的表达诱导血管生成。故我们设想血管紧张素Ⅱ是否通过AT1受体激活内质网应激的IRE1通路上调VEGF的表达从而诱导内皮细胞生成血管,并进一步探讨其中的具体机制。 方法：(1)不同浓度的血管紧张素Ⅱ(OnM、0.1nM、1nM、10nM、30nM)处理脐静脉内皮细胞24小时后,种于matrix胶,37℃孵育16-18小时,显微镜下观察并拍照； (2)不同浓度的血管紧张素Ⅱ(OnM、0.1nM、1nM、10nM、30nM)处理脐静脉内皮细胞24小时后,收集胞浆蛋白,Western Blot法检测GRP78、IRE1、JNK蛋白水平的表达； (3)不同浓度的AT1受体拮抗剂氯沙坦(1uM、3uM、10uM)、AT2受体特异性抑制剂PD123319(10μM)预处理HUVEC1小时后,再加入1nM AngⅡ处理24小时,及PD123319(10μM)、氯沙坦(10uM)单独处理HUVEC24小时后,收集细胞,种于matrix胶,37℃孵育16-18小时,显微镜下观察并拍照； (4)氯沙坦(10μM)、IRE1特异性抑制剂irestatin9389(2.5μM)、JNK特异性抑制剂SP600125(10μM)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10μM)预处理HUVEC1小时后,再加入1nMAngⅡ处理24小时,收集细胞,matrix胶上行血管生成试验,显微镜下观察并拍照； (5)氯沙坦(10μM)、irestatin9389(2.5μM)、SP600125(10μM)、SB203580(10μM)预处理HUVEC1小时后,再加入1nM AngⅡ处理24小时,及1nM AngⅡ单独处理24小时后,收集胞浆蛋白,Western Blot法检测GRP78、IRE1、JNK、VEGF、p38MAPK的表达； (6)氯沙坦(10μM)、irestatin9389(2.5μM)、SP600125(10μM)、SB203580(10μM)预处理HUVEC1小时后,再加入1nMAngⅡ处理24小时,及1nM AngⅡ单独处理24小时后,提取细胞RNA,采用半定量PCR检测GRP78、IRE1、JNK的转录水平。 结果：(1)AngⅡ诱导内皮细胞的血管生成并触发内质网应激：AngⅡ(0.1nM、1nM、10nM、30nM)可促进内皮细胞血管生成,且呈抛物线样浓度相关性,以1nM时血管生成最为显著；与促血管生成效应一致,AngⅡ (0.1nM、1nM、10nM、30nM)明显增加内皮细胞GRP78、IRE1、JNK蛋白水平的表达,且以1nM时最为显著； (2) AngⅡ通过AT1受体介导内皮细胞的血管生成：AT1受体拮抗剂氯沙坦(1μM,3μM,10μM)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的血管生成,10μM时抑制作用最为明显；而AT2受体特异性抑制剂PD123319(10μM)对AngⅡ诱导的血管生成无明显作用； (3)AT1受体/内质网应激途径在AngⅡ诱导的内皮细胞血管生成中的作用：AT1受体拮抗剂氯沙坦、IRE1特异性抑制剂irestatin9389、JNK特异性抑制剂SP600125、p38MAPK特异性抑制剂SB203580均能抑制AngⅡ诱导的血管生成； (4)AT1受体／内质网应激途径对AngⅡ诱导的VEGF表达的作用：AngⅡ显著增加VEGF蛋白水平的表达,而氯沙坦、irestatin9389、SP600125、SB203580均能不同程度的抑制AngⅡ诱导的VEGF蛋白水平的表达； (5) AngⅡ与AT1R/IRE1/JNK/p38MAPKs途径的关系：氯沙坦可抑制AngⅡ诱导的GRP78蛋白水平及mRNA的表达,而irestatin9389、SP600125、SB203580均无此抑制作用；氯沙坦、irestatin9389均能抑制AngⅡ诱导的IRE1蛋白水平及mRNA的表达,而SP600125、SB203580对IRE1的表达无影响；氯沙坦、irestatin9389、SP600125均能抑制AngⅡ诱导的JNK蛋白水平及mRNA的表达,而SB203580对此无影响；以上所有抑制剂均能抑制AngⅡ诱导的p38MAPK蛋白水平的表达。 结论：AngⅡ可通过AT1受体激活内质网应激IRE1/JNK/p38MAPK通路上调VEGF蛋白水平表达,从而诱导HUVEC的血管生成。

【关键词】：
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R54
【目录】：

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