H型高血压大鼠脑损伤免疫机制的研究

发布时间：2018-04-07 15:42

本文选题：SHR　切入点：WKY　出处：《天津医科大学》2016年博士论文

【摘要】：研究目的:(1)研究不同种属、不同干预方式、不同时间点大鼠体重、血压以及血浆Hcy水平;(2)检测不同时间点大鼠血浆细胞因子水平、脑组织相关基因m RNA、蛋白以及脑组织病理学检测;(3)检测不同时间点WKY-C/M/T及SHR-C/M/T外周血Th17、Treg淋巴细胞比例;(4)观察大鼠头颅MRI影像学改变。研究内容与方法:(1)将60只SHR、60只WKY按照随机分配的原则分为6组,SHR-C组、SHR-M以及SHR-T组,WKY-C组、WKY-M组以及WKY-T组,每组20只,C组给予普通饲料16周、M组给予添加2%蛋氨酸16周、T组给予添加2%蛋氨酸饲料喂养8周,自第9周第1天给予Vit B12 0.09mg/kg/d、叶酸4mg/kg/d、Vit B6 12mg/kg/d灌胃治疗,共计16周,并在分别于试验开始第一天(0周)、第4周、第8周、第12周、第16周测量大鼠的体质量,应用无创鼠尾测压法测量大鼠SBP,应用ELISA方法检测大鼠血浆Hcy水平;(2)分别于试验第8周、第12周、第16周应用ELISA法检测大鼠血浆细胞因子IL-17、IL-10、TGF-β、IL-6水平,于试验第8周、第12周、第16周应用PCR法检测大鼠脑组织IL-10、IL-17、Foxp3、RORγt m RNA表达,第16周应用Western Blot法检测大鼠脑组织Foxp3、RORγt蛋白表达,于试验第16周处死大鼠,进行脑组织病理学观察;(3)分别于试验的第0周、第4周、第8周、第12周及第16周应用Beckman Cytomics FC 500流式细胞仪对WKY-C/M/T及SHR-C/M/T组大鼠外周血Th17、Treg淋巴细胞进行分析;(4)应用Bruker 7.0T高场强小动物核磁共振扫描仪对24周龄WKY-C/M/T及SHR-C/M/T进行头颅常规MRI检测。结果:(1)试验16周内无论WKY还是SHR,体重都呈现上升趋势,以WKY-C最为明显,高蛋氨酸饮食能够使体重生长减缓,而叶酸和维生素B饮食对高蛋氨酸饮食导致的体重减缓影响不大;SHR-C/M/T 3组大鼠的SBP和血浆Hcy水平明显高于WKY-C/M/T 3组,蛋氨酸干预的M组和T组明显高于正常饮食的C组,经过叶酸和Vit B6、Vit B12联合治疗后的T组低于同时期M组血压,并且这种差异在第8周之后更加显著;(2)WKY组的IL-6水平保持不变,并且WKY-C、WKY-M和WKY-T没有统计学差异,SHR-C组IL-6水平持续上升,SHR-T组的IL-6水平持续下降,第12周,SHR-M组显著高于SHR-T组,第16周,SHR-M组显著高于SHR-C组和SHR-T组,第12和16周SHR组和WKY组的IL-6水平存在统计学差异。WKY-M组的IL-17水平持续上升,在第16周显著高于WKY-C组和WKY-T组,SHR-C组和SHR-M组IL-17水平呈上升趋势,SHR-M组上升更快,SHR-T组先稍微上升后下降,在12周达到最高水平47.55 pg/ml。WKY-C、SHR-C组IL-10基本保持不变,WKY-M、SHR-M组IL-10持续下降,且SHR组下降较迅速;WKY-T、SHR-T组IL-10不断上升,且SHR组上升较快,在第16周,WKY-M、SHR-M IL-10均低于同种属C组和T组,且这种差异SHR组更明显。8-16周,WKY-C组和SHR-C组血清中TGF-β保持不变,WKY-M组和SHR-M组TGF-β缓慢下降,WKY-T组和SHR-T组TGF-β缓慢上升,在第16周,无论大鼠WKY组还是高血压大鼠SHR组,M组TGF-β都显著低于C组和T组。WKY-C组和SHR-C组RORγt m RNA水平基本保持不变,WKY-M组和SHR-M组RORγt m RNA水平持续上升,SHR组-M上升较迅速,WKY-T组和SHR-T组RORγt m RNA不断下降,SHR-T组下降较快;WKY-C组和SHR-C组IL-17 m RNA水平基本保持不变,WKY-M组和SHR-M组IL-17 m RNA水平持续上升,SHR-M组上升较迅速,WKY-T组和SHR-T组IL-17 m RNA不断下降,12周之后下降速度减缓,SHR-T组下降较快;WKY-C组、SHR-C组、WKY-M组和SHR-M组Foxp3 m RNA水平基本保持不变,WKY-T组Foxp3 m RNA水平持续上升,SHR-T组Foxp3的m RNA水平先迅速上升后下降,第12周达到峰值。WKY-C组、WKY-M组、WKY-T组、SHR-C组和SHR-M组IL-10m RNA水平基本不变,SHR-T组先迅速上升后迅速下降,第12周达到峰值,且显著高于SHR-C组和SHR-T组。WKY和SHR脑组织中,RORγt在C组和T组水平较高,M组表达较低,Foxp3的表达情况恰恰相反,在C组和T组水平较低,M组表达较高。病理组织染色显示,WKY-M组Th17阳性细胞远远高于对WKY-C组,经过叶酸和维生素B治疗后WKY-T组Th17阳性细胞减少,与WKY-C组基本持平,WKY-M组Treg阳性细胞远远低于对照组WKY-C组,经过叶酸和维生素B治疗后WKY-T组Treg阳性细胞增多,但是仍然少于WKY-C组;SHR组Th17细胞和Treg细胞变化趋势WKY相似,WKY-M组和SHR-M组部分区域血管轻度增生,SHR-M组部分区域神经细胞增多,WKY-M组部分区域神经细胞减少甚至萎缩。结论Hcy的致病作用在m RNA水平、蛋白水平、血浆水平、组织水平均得到证实,且经叶酸、VB族治疗后,其致病作用呈现出减弱趋势;(3)0周到第16周,WKY-C及SHR-C组Tregs细胞逐渐升高,WKY-M及SHR-M组Tregs细胞例逐渐下降,WKY-T及SHR-T组Tregs细胞出现先降低后升高趋势(第8周为转折点);而WKY-C及SHR-C组Th17细胞逐渐降低,WKY-M及SHR-M组Th17细胞逐渐升高,WKY-T及SHR-T组Th17细胞呈现出先升高后降低趋势;(4)6组共计24只24周龄大鼠均未出现明显缺血性脑病表现。结论:(1)高蛋氨酸饮食可以成功造成大鼠血浆Hcy水平升高,以SHR升高为著,同时HHcy可以造成不同中属于大鼠血压升高,经叶酸和Vit B6、Vit B12联合治疗后可降低血浆Hcy水平同时起到降低血压的作用;(2)Hcy的致病作用在m RNA水平、蛋白水平、血浆水平、组织水平均得到证实,且经叶酸、VB族治疗后,其致病作用呈现出减弱趋势;(3)高蛋氨酸可造成大鼠外周血Tregs细胞比例下降,Th17细胞比例升高,经叶酸、Vit B6及Vit B12联合治疗干预后,Hcy的作用减弱,是Tregs细胞比例升高、Th17细胞比例下降;(4)24周龄WKY/SHR大鼠并未出现缺血性脑血管病表现,考虑与大鼠种属、年龄及造模方法有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1

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