血管紧张素Ⅱ诱导小鼠胚胎心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究

发布时间：2018-05-12 05:14

  本文选题：血管紧张素Ⅱ + 心外膜祖细胞　； 参考：《重庆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目前,冠心病仍是世界上最常见的死亡原因,严重威胁人类的健康。研究冠状动脉的发育,对于冠心病的防治以及人类的健康保障具有重要意义。心外膜祖细胞(epicardial progenitor cells;Epi Cs)是最近提出的一组心脏祖细胞,起源于前体心外膜祖细胞,是一个表达Tbx18、Wt1、Tcf21等多种标记基因的祖细胞池。因其可分化形成血管平滑肌细胞、成纤维细胞、窦房结起搏细胞等多种心系细胞,对胚胎心脏的形成起重要作用,成为目前心肌再生研究的一个焦点。目前已有大量研究证实心外膜祖细胞是冠状动脉血管平滑肌细胞的主要来源之一,且参与该分化过程的机制众多。血管紧张素Ⅱ(Angiontensin II;Ang II)作为肾素-血管紧张素-醛固酮系统中最重要的效应分子,主要通过Ang II受体AT1、AT2起作用,除了本身固有的体液调节功能外,还是一个生长调节因子,与细胞的生长、发育、分化及调亡均密切相关。除此之外,大量研究发现AngⅡ可以诱导脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞、等分化为平滑肌细胞。因此明确AngⅡ对心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化的作用具有重要的临床意义。第一部分:心外膜祖细胞的培养及鉴定目的:在体外成功培养C57BL/6小鼠E12.5d胚胎心外膜祖细胞,为体外研究心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化机制奠定基础。方法:分离小鼠E12.5d胚胎心脏组织进行原代细胞培养得到心外膜祖细胞,并通过细胞免疫荧光方法检测Epi Cs细胞特异性标志物Tbx18、Wt1的表达。结果:所培养的原代细胞高度表达Tbx18、Wt1,结合其来源和形态证实成功培养出心外膜祖细胞。结论:利用C57BL/6小鼠E12.5d胚胎心脏组织能成功培养出心外膜祖细胞。第二部分:Ang II通过受体AT1诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化目的:探讨Ang II诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化及相关通路。方法:细胞免疫荧光检测心外膜祖细胞表面AngⅡ作用受体AT1、AT2的表达。培养得到的原代心外膜祖细胞随机分为AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组、AngⅡ+PD123319组和对照组进行干预。免疫荧光检测血管平滑肌细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、肌球蛋白重链11(Myosin heavy chain 11,Myh11)在各组的表达情况,实时荧光定量PCR检测α-SMA、Myh11在各组的m RNA表达水平,胶原凝胶收缩实验分别检测干预后细胞的收缩功能。结果:心外膜祖细胞膜表面有AngⅡ受体AT1、AT2的表达,给予AngⅡ干预7天后实验组α-SMA、Myh11的表达明显增多,其m RNA水平明显高于对照组,经AngⅡ诱导的细胞在卡巴胆碱的作用下也展示了明显的收缩性。氯沙坦阻断AngⅡ受体AT1后,AngⅡ干预使心外膜祖细胞的α-SMA、Myh11表达下降;PD123319阻断AngⅡ受体AT2后,AngⅡ干预对α-SMA、Myh11表达没有明显影响。结论:血管紧张素Ⅱ可以通过受体AT1有效诱导小鼠心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞。
[Abstract]:At present, coronary heart disease is still the most common cause of death in the world, a serious threat to human health. It is of great significance to study the development of coronary artery for prevention and treatment of coronary heart disease and human health protection. Epicardial progenitor cell (epicardial progenitor cells) is a recently proposed group of cardiac progenitor cells, originated from precursor epicardial progenitor cells. It is a pool of progenitor cells expressing Tbx18, Wt1, Tcf21 and other marker genes. Because of its differentiation into vascular smooth muscle cells, fibroblasts, sinus node pacemaker cells and other heart cells, it plays an important role in the formation of embryonic heart, and has become a focus of myocardial regeneration. At present, many studies have confirmed that epicardial progenitor cells are one of the main sources of vascular smooth muscle cells in coronary artery, and there are many mechanisms involved in the differentiation process. As the most important effector of renin-angiotensin-aldosterone system, angiotensin II (Angiontensin II) acts mainly through Ang II receptor AT1, AT2, and is also a growth regulator in addition to its inherent humoral regulatory function. It is closely related to cell growth, development, differentiation and apoptosis. In addition, a large number of studies have found that Ang 鈪，

本文编号：1877247