曲古菌素A调控大鼠心梗组织中成熟树突状细胞的机制研究

发布时间：2018-06-08 13:45

本文选题：成熟DCs + TSA　；参考：《吉林大学》2017年硕士论文

【摘要】：心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)是一种致死率较高的心血管系统疾病。在我国每年大约有数百万人因为急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)或者心力衰竭而死亡。心肌梗死后炎性微环境在调控心肌修复的过程中具有重要作用。因此,心肌梗死后组织修复的过程中炎性微环境的合理调控,对于阻止梗死后心脏渐进性功能障碍、抑制病理性重构、减少心力衰竭的发生具有重要意义。研究炎性微环境的调控机制可为心肌梗死后组织修复提供新的靶标,为提高心肌梗死病人生存质量提供新的策略。树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是心肌梗死后炎性微环境的重要调控者,其通过调控适度的炎症反应,清除坏死心肌细胞,促进心肌组织的损伤修复。然而,心肌梗死后组织修复的机制复杂,过度的炎症反应会引起心脏基质降解与细胞凋亡,延缓损伤的修复。有文献报道,心肌梗死大鼠梗死区和梗死边缘区的DCs数量增加,DCs对于心肌梗死后炎性微环境的调控存在不容忽视的作用。DCs按其成熟程度可分为未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)和成熟树突状细胞(mature DCs,m DCs),未成熟DCs具有较强的摄取和加工抗原能力及迁移能力,在炎症信号刺激下转变为成熟DCs;成熟DCs抗原提呈能力明显增强,高表达共刺激分子和趋化因子受体,能够使T细胞活化、增殖和分化成功能不同的T细胞亚群。成熟DCs分泌的细胞因子和趋化因子能够吸引和活化天然免疫细胞以形成免疫应答与调控的网络,进而调控炎性微环境,改善心肌梗死后组织修复的进程。JAKs(Janus Kinase)和STATs(Signal transducers and activators of transcription)的功能随着生长因子和细胞因子的研究而逐渐被大家所熟知。JAK/STAT信号通路可以调控心肌梗死后的组织修复。近年来,研究表明JAK2和STAT5能够调控DCs分化与成熟。但JAK2/STAT5信号通路对心肌梗死后DCs的成熟的调控尚未见报道。我们前期研究发现,曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)可以促进心肌梗死大鼠心肌损伤修复,并增加心肌梗死大鼠心肌组织中DCs细胞的数量。由此我们可知TSA对梗死大鼠心肌具有保护作用,同时可增加心肌梗死后浸润到梗死区域的DCs数量。然而TSA调控心肌梗死后DCs成熟的机制尚未明确。我们推测TSA可能是通过影响DCs的成熟,调控心肌梗死后的炎性反应,从而促进心肌梗死后的组织修复。研究目的:本研究旨在探讨TSA调控DCs的成熟,调控心肌梗死后的炎性反应,促进心肌梗死后的组织修复机制。实验方法:本实验以雄性Wistar大鼠为研究对象,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,采用预防给药方式,术前连续5天给予TSA或者生理盐水,术前连续3天给予JAK2抑制剂AG490,分别在术后1d、3d、7d、14d以及28d取材;采用TTC染色法检测心肌梗死面积;采用血清心肌酶试剂盒检测心肌三酶活性,观察TSA对心肌梗死大鼠的保护作用;采用流式细胞术检测成熟DCs的表面标记CD103、MHC II、CD80、CD86,观察心肌梗死大鼠心肌组织中成熟DCs数量随心肌梗死时间的变化趋势;采用Western-blot检测P-JAK2、P-STAT5蛋白的表达,观察TSA、JAK2抑制剂AG490对调控DCs成熟JAK2/STAT5信号通路的影响;采用ELISA法,检测TSA对心肌梗死大鼠血清IL-1、TNF-α、IFN-γ、IL-10及TGF-β等细胞因子表达的影响。实验结果:在所观察的各个时间点,观察到如下结果:(1)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌梗死面积均增大(P0.01);血清中CK、AST和LDH的活性均升高(P0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌梗死面积均减小(P0.05),血清中CK、AST和LDH的活性均有所降低(P0.05),说明TSA对梗死心肌具有保护作用。(2)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌组织中成熟DCs数量均增多(P0.05),且在第7天达到峰值(P0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌组织中成熟DCs数量均增多(P0.05),且在第7天达到峰值,说明TSA可以增加大鼠心肌组织中成熟DCs的数量。(3)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量升高(P0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量升高(P0.05),并且与成熟DCs数量的变化趋势一致;与TSA组实验结果相比,Model-TSA+AG490组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量均降低(P0.05)、成熟DCs数量均降低(P0.05),说明TSA通过JAK2信号通路促进心肌组织中成熟DCs数量的增加。(4)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、IL-10及TGF-β等细胞因子表达量均上调(P0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、及TGF-β等细胞因子表达量均上调(P0.05),IL-10的表达下调(P0.05);与TSA组实验结果相比,Model-TSA+AG490组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、及TGF-β等细胞因子表达量均下调(P0.05),IL-10的表达上调(P0.05),说明TSA通过JAK2信号通路调控细胞因子水平。实验结论:(1)TSA减少心肌梗死面积、降低心肌三酶的表达,发挥心肌保护作用;(2)TSA通过JAK2/STAT5信号通路增加大鼠心肌组织中成熟DCs的数量、改变细胞因子水平。
[Abstract]:In recent years , it has been reported that the regulation of inflammatory microenvironment plays an important role in the regulation and regulation of inflammatory microenvironment after myocardial infarction . Objective : To investigate the effect of TSA on myocardial infarction in rats with myocardial infarction and to observe the effect of TSA on myocardial infarction . ( 3 ) Compared with the experimental results of the sham operation group , the number of mature DCs in the myocardial tissue of the model group increased ( P0.05 ) . Compared with the experimental results of the model group , the expression of P - 2 and P - STAT5 in the myocardial tissue of the model group increased ( P0.05 ) , and the number of mature DCs decreased ( P0.05 ) . ( 4 ) The expression of IL - 1 , TNF - 伪 , IFN - 纬 , IL - 10 and TGF - 尾 were up - regulated in the serum of the model group ( P0.05 ) . The expression of IL - 1 , TNF - 伪 , IFN - 纬 and TGF - 尾 were down - regulated ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R542.22

【参考文献】