薤白皂苷抑制ADP诱导大鼠血小板活化及聚集的蛋白质组学研究

发布时间：2018-07-14 21:09

【摘要】：【目的】1.设立冠心病患者组并以健康志愿者为对照,运用蛋白质组学技术分离和鉴定相关差异蛋白,初步阐明差异蛋白在冠心病中的作用。2.分别测定不同剂量薤白皂苷化合物对ADP诱导活化的大鼠血小板膜糖蛋白CD62P表达率及血小板聚集率的影响,探讨薤白皂苷化合物对血小板活化和聚集过程的影响。3.应用蛋白质组学技术鉴定出最优剂量薤白皂苷化合物作用下的大鼠血小板差异蛋白,探究差异蛋白在血小板活化及聚集中的作用。【研究方法】1.为探讨冠心病患者血小板蛋白质组学改变,本研究纳入冠心病患者组以及健康志愿者人组作为实验对象,静脉抽取10ml空腹全血,采用差速离心的方法制备血小板,将血小板溶于Lysis buffer中,并通过丙酮沉淀的方法提取蛋白,用基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱技术(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-TOF)进行鉴定,并查询差异蛋白作用。分析其对冠心病发展的影响。2.为了验证薤白皂苷作用后血小板活化功能的改变,研究选择雄性SD大鼠为实验对象。用生理盐水(2m L/d)、阿司匹林(30mg/kg/d)、不同浓度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷化合物灌胃大鼠7天后,制备大鼠血小板悬液,加入终浓度20μM ADP激活10min。检测大鼠血小板膜糖蛋白CD62P表达率,探讨不同剂量薤白皂苷化合物作用血小板后的活化功能改变。3.为了验证薤白皂苷作用后血小板聚集功能的改变,研究选择雄性SD大鼠为实验对象。用生理盐水(2m L/d)、阿司匹林(30mg/kg/d)、不同浓度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷化合物灌胃大鼠7天后,制备大鼠血小板悬液,加入终浓度20μM ADP激活10min。检测大鼠血小板聚集率,探讨不同剂量薤白皂苷化合物作用血小板后的聚集功能改变。4.为了鉴定最优剂量薤白皂苷化合物作用下的大鼠血小板差异蛋白,探讨薤白皂苷对ADP诱导大鼠血小板的蛋白质组影响。研究选择雄性SD大鼠为实验对象,实验分为2个处理组:2m L/d生理盐水对照组、最优剂量薤白皂苷组(经检测为抑制血小板活化和聚集的最优剂量)。用上述剂量灌胃大鼠7天后制备血小板悬液,加入终浓度20u M ADP激活10min。提取血小板蛋白质采用蛋白质组学技术分离及鉴定,并探究差异蛋白在血小板活化和聚集环节所起作用。【结果】1.通过双向电泳分别获得2张冠心病患者凝胶和健康志愿者凝胶,分析出17个差异蛋白。质谱鉴定并搜索数据库后发现,与健康志愿组相比,冠心病组有7个蛋白表达出现差异:Plastin-2、Coronin-1A、Clusterin、Annexin A1、Chloride intracellular channel protein 1、Peroxiredoxin-6、Peroxiredoxin-2。2.流式细胞术结果显示,与对照组相比,不同浓度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷均能一定程度上降低CD62P表达率,且呈一定的浓度依赖性,且薤白高剂量组抑制作用最为显著。3.血小板聚集率结果显示,不同浓度(168mg/kg、337mg/kg、674mg/kg)的薤白皂苷与对照组相比,均能一定程度上抑制血小板的聚合作用,且亦呈一定的浓度依赖性。根据血小板抑制率公式计算阿司匹林组、薤白低剂量组、薤白中剂量组、薤白高剂量组对ADP诱导的大鼠血小板聚集的抑制率依次为19.08%、14.46%、22.06%、33.85%。薤白高剂量组作用更为突出。4.薤白皂苷高剂量处理组和对照组血小板总蛋白分别获得3张凝胶图谱,质谱并搜索数据库后发现,与对照组相比,薤白高剂量处理组有7个蛋白点表达改变:Calreticulin、Actin、LIM and SH3 domain protein 1、RCG55135、Protein phosphatase 1、Suppressor of IKBKE 1、Ribulose-5-phosphate-3-epimerase。【结论】1.血小板蛋白质Plastin-2、Peroxiredoxin-2、Peroxiredoxin-6、Annexin A1、Chloride intracellular channel protein 1、Clusterin、Coronin-1A是冠心病患者与健康人差异表达蛋白。2.不同浓度的薤白皂苷能够一定程度上抑制ADP诱导的大鼠血小板活化及聚集,其中高剂量组效果更明显。3.血小板蛋白质Calreticulin、Actin、LIM and SH3 domain protein 1、RCG55135、Protein phosphatase 1、Suppressor of IKBKE 1、Ribulose-5-phosphate-3-epimerase是薤白皂苷处理ADP激活大鼠血小板的差异表达蛋白。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of different doses of Allium macrostemon on platelet activation and platelet aggregation in patients with coronary heart disease ( CHD ) and to investigate the effects of different doses of Allium macrostemon on platelet activation and platelet aggregation . In order to study the effect of macrostemon on platelet aggregation after 7 days , the rats were divided into two groups : normal saline ( 2m L / d ) , aspirin ( 30 mg / kg / day ) , different concentration ( 168 mg / kg , 337 mg / kg , 674mg / kg ) . The results showed that compared with the control group , the inhibitory rate of macrostemon on ADP - induced platelet aggregation was 19.08 % , 14.46 % , 22.06 % and 33.85 % . Conclusion : Plastin - 2 , Peroxiretin - 2 , Peroxiretin - 6 , annexin A1 , Chloride intracellular channel protein 1 , Tazterin , Coronin - 1A are the differentially expressed proteins of ADP - induced platelet activation and aggregation in patients with coronary heart disease .
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.4

【参考文献】