microRNA-155对动脉粥样硬化免疫炎症反应的影响

发布时间：2018-11-17 10:27

【摘要】：背景:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是许多重要血管事件的病理基础。当前社会,人们的生活水平逐年升高,医疗卫生保障也持续改善,使人口老龄化加剧,从而导致老年性疾病的发病率逐年上升,其中最引人注目的便是动脉粥样硬化。目前,动脉粥样硬化造成的心血管疾病已成为在全球发病率和死亡率中居于首位的疾病。因而对AS的发病机制及病理过程进行深入探讨具有重大意义。动脉粥样硬化的发病机制非常复杂,涉及多种因素。越来越多的证据证明,免疫炎症反应在动脉粥样硬化的发生以及发展过程中有着不容忽视的重要作用。Toll样受体(Toll like receptors,TLR)主要介导非特异性免疫反应和炎性反应,其中的TLR4与人类动脉粥样硬化的关系最为密切,而TLR4中的髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,My D88)依赖性途径最为重要。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一组长约为22个核苷酸的非编码RNA,具有调节细胞的增殖、分化的作用,参与多种器官和组织生理和病理机制的发生,在心脏相关疾病的发生发展中也有着调节作用。既往研究发现,miR-155是一种已发现的有多功能的miRNA,多项研究表明miR-155表达增加能抑制Toll样受体配体和细胞因子诱导蛋白水解酶类的生成,并影响多种炎症因子的表达。其中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和炎症因子白介素-10(Interleukin-10,IL-10)与动脉粥样硬化性疾病有着密切的联系。既往研究发现,My D88是miR-155的靶基因,miR-155可通过抑制My D88的翻译对其发挥调控作用。那么miR-155调控My D88的表达在动脉粥样硬化过程中的存在怎样的作用有待研究。目的:本研究旨在探讨miR-155是否通过其靶基因MyD88调控AS中TLR4信号通路,通过对免疫炎症调节起到抗动脉粥样硬化作用。方法:一、建立载脂蛋白E基因敲除(ApoE gene knockout,ApoE~(-/-))小鼠AS模型,选取4-6周龄的雄性ApoE~(-/-)小鼠共10只,给予高脂饲料喂养20周,建立AS模型,选取10只正常饲料喂养的4-6周龄的雄性C57BL/6小鼠作为正常小鼠对照组。应用HE染色法测定主动脉内动脉粥样硬化斑块发生发展情况,免疫组化测定动脉中动脉粥样硬化斑块中的My D88蛋白表达,酶联免疫法(ELISA)检测血清白中IL-10、TGF-β1、MCP-1水平。二、体外培养小鼠巨噬细胞,给予低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)刺激构建泡沫细胞模型。实验分组:(1)miR-155 mimic组:转染miR-155 mimic+ox-LDL;(2)miR-155 mimic阴性对照组:转染miR-155 mimic阴性对照+ox-LDL;(3)miR-155inhibitor组:转染miR-155 inhibitor+ox-LDL;(4)miR-155 inhibitor阴性对照组:转染miR-155 inhibitor阴性对照+ox-LDL;(5)My D88 si RNA组:转染My D88 si RNA+ox-LDL;(6)My D88 si RNA阴性对照组:转染My D88si RNA+ox-LDL;应用Real-time PCR法测定My D88的基因表达,Western blot法测定My D88的蛋白表达,酶联免疫法检测细胞上清液中炎症因子IL-10、TGF-β1、MCP-1水平。结果:一、ApoE~(-/-)小鼠高脂饮食后,动脉血管HE染色显示出现明显的动脉粥样硬化斑块,免疫组化结果显示动脉粥样硬化斑块中My D88显色明显,酶联免疫法(ELISA)检测血清示动脉粥样硬化小鼠组IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明显高于对照组;正常对照组小鼠的动脉血管HE染色显示未出现明显的动脉粥样硬化斑块,免疫组织化学染色结果显示血管中My D88呈阴性。二、ox-LDL刺激巨噬细胞后,miR-155 mimic组较miR-155 mimic阴性对照组,My D88基因水平表达未见明显变化;蛋白水平上,My D88表达明显降低;细胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明显降低(P0.05)。miR-155 inhibitor组较miR-155 inhibitor阴性对照组,My D88基因水平表达未见明显变化;My D88表达、细胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明显增高(P0.05);My D88 si RNA组较My D88组阴性对照组,My D88表达、细胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明显降低(P0.05)。结论:1.MyD88和炎症因子在动脉粥样硬化模型小鼠中表达明显增加;2.miR-155可抑制My D88蛋白的表达;3.提高miR-155可以降低炎症因子IL-10、TGF-β1、MCP-1的释放,反之则升高。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R543.5

【参考文献】