siRNA靶向抑制RAGE表达对大鼠急性心肌梗死后炎症反应的影响

发布时间：2018-11-20 21:08

【摘要】：目的:观察腺病毒介导siRNA靶向抑制心脏RAGE基因表达对大鼠急性心肌梗死后炎症反应的影响。方法:原代培养心肌细胞,给予不同滴度病毒液感染并确定最佳病毒感染复数。细胞实验分组:(1)空白对照组(Con组):正常培养,不予任何干预;(2)对照siRNA组(control siRNA组):感染携带无序siRNA的腺病毒后低氧培养4h;(3)siRNA抑制组(RAGE siRNA组):感染携带RAGE靶向siRNA的重组腺病毒后低氧培养4h。定量PCR检测RAGE基因表达量,Western Blot检测RAGE蛋白及ERK1/2、pERK1/2蛋白表达水平。动物实验分组:(1)假手术组(Sham)12只,开胸暴露心脏,不予结扎冠脉;(2)心肌梗死手术组(AMI)12只,结扎冠状动脉前降支,术后无其他干预;(3)对照siRNA组(control siRNA)12只,结扎前降支后30min于梗死周边区域注射携带无序siRNA的重组腺病毒;(4)siRNA干预组(RAGE siRNA组)12只,结扎前降支后30min于梗死周边区域注射靶向RAGE基因的siRNA腺病毒。所有实验大鼠分别于术后1周和3周行心脏彩超检查心功能,术后3周处死取材,取心脏不同部位心肌组织,定量PCR技术检测RAGE基因mRNA表达水平;应用Western blot方法和免疫组化分析检测RAGE蛋白和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达水平。结果:在细胞实验中,siRNA抑制组RAGE的mRNA水平较对照siRNA组显著降低(p=0.009),较Con组略高,但差异无统计学意义(p=0.051);siRNA抑制组RAGE蛋白表达水平较对照siRNA组显著降低(p=0.029),与Con组比较无统计学意义(p=0.064);siRNA抑制组ERK1/2蛋白的pERK1/2/ERK1/2比值较对照siRNA组降低(p=0.011),与Con组比较无统计学意义(p=0.067),siRNA抑制组pERK1/2蛋白较对照siRNA组降低。对照siRNA组RAGE的mRNA水平、蛋白表达水平和pERK1/2蛋白表达水平均较Con组明显升高(p0.001)。在动物实验中,心肌梗死手术组(AMI)梗死区心肌组织RAGE的mRNA水平较非梗死区明显升高(p0.001);Western Blot分析显示梗死区RAGE蛋白和pERK1/2蛋白表达水平明显较非梗死区高(p0.001);假手术组(Sham)心肌组织RAGE的mRNA水平和RAGE蛋白表达水平及pERK1/2蛋白表达水平与AMI组非梗死区心肌组织比较无显著性差异(分别为p=0.343,p=0.298和p=0.336)。予siRNA干预后,术后1周后超声结果显示对照siRNA组与siRNA干扰组相比,EF无明显差别(p=0.409);术后3周超声结果显示,与对照siRNA组相比,siRNA干扰组EF较术后1周好转,EF显著高于对照siRNA组(p=0.011);qPCR检测和Western blot检测结果显示,同对照siRNA组相比,siRNA干扰组RAGE的mRNA水平和蛋白表达水平显著下降(分别为p0.001和p=0.034);免疫组化结果显示siRNA干扰组心肌组织RAGE蛋白及pERK1/2蛋白表达较对照siRNA组显著下降;而siRNA干扰组RAGE的mRNA及RAGE、pERK1/2蛋白表达水平与Sham组相比均无显著性差异(p0.05)。结论:靶向RAGE的siRNA能显著抑制低氧培养的心肌细胞RAGE基因的表达。于大鼠心肌梗死周边区域注射靶向RAGE基因的siRNA重组腺病毒能有效抑制梗死区心肌RAGE蛋白和pERK1/2蛋白表达,减少MAP/ERK1/2途径激活所引起的炎症反应,并提高心肌梗死后心功能。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R542.22

【参考文献】

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本文编号：2346031