大鼠miR-24腺病毒载体构建和鉴定

发布时间：2018-12-26 17:18

【摘要】：目的构建含miR-24基因的重组腺病毒,为后期研究miR-24在大鼠颈动脉球囊损伤所致血管再狭窄(RS)中的作用及分子机制奠定基础。方法 PCR钓取目的基因miR-24,连接入穿梭载体GV139。采用Ad Max腺病毒包装系统,将构建的miR-24重组腺病毒穿梭质粒与辅助包装质粒(PBHG)共转染HEK293细胞,通过Cre/lox P重组酶系统的作用实现重组,得到重组腺病毒,并进行重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定。结果成功构建了大鼠miR-24腺病毒载体,滴度为1×109PFU/ml。结论成功获得含miR-24基因的重组腺病毒,为后期顺利开展有关miR-24在血管RS中的作用及分子机制研究提供了可能。
[Abstract]:Objective to construct recombinant adenovirus containing miR-24 gene and to study the role and molecular mechanism of miR-24 in restenosis (RS) induced by balloon injury of carotid artery in rats. Methods PCR ligated the target gene miR-24, into shuttle vector GV139.. Using the Ad Max adenovirus packaging system, the recombinant adenovirus shuttle plasmid of miR-24 was co-transfected into HEK293 cells with the auxiliary package plasmid (PBHG). The recombinant adenovirus was obtained by the function of Cre/lox P recombinant enzyme system. The recombinant adenovirus was amplified, purified and titer determined. Results the adenovirus vector of rat miR-24 was successfully constructed with a titer of 1 脳 109 PFU / ml. Conclusion Recombinant adenovirus containing miR-24 gene was successfully obtained, which provided the possibility for the study of the role and molecular mechanism of miR-24 in vascular RS.
【作者单位】： 三峡大学心血管病研究所三峡大学第一临床医学院心内科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81170133,81200088,81470387) 三峡大学硕士学位论文培优基金(No.2015PY052)
【分类号】：R54

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本文编号：2392436