miRNA-21在动脉粥样硬化炎症反应中的作用

发布时间：2019-02-23 09:38

【摘要】：目的:探讨在动脉粥样硬化()炎症反应中的作用。方法:收集2015年10月至2016年8月于天津医科大学第二医院心脏科住院的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者74例,以同期住院的50例非冠心病患者作为对照组,排除恶性肿瘤、血栓栓塞、进展中的肝脏疾病、肾功能衰竭、瓣膜性心脏病、扩张型心肌病及其他炎性疾病等。所有患者均行血常规、肝肾功能、心电图、超声心动图等检查。收集入选患者血浆标本,利用实时定量PCR检测入选患者血浆中mi R-21的表达水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆炎症因子白介素-6(IL-6)水平。采用多元Logistic回归分析急性STEMI的危险因素。在Lipo3000的介导下,将mi R-21类似物(mimics)/抑制剂(inhibitor)/阴性对照(NC)及mi R-21靶基因程序性细胞死亡因子4(PDCD4)特异性si RNA(si PDCD4)分别转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞6h后,加入终浓度为50μg/ml的氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)继续培养48h,同时设立空白对照组(未转染且未加入ox-LDL)及ox-LDL组(仅加入终浓度为50μg/ml的ox-LDL)。ELISA法测定过表达mi R-21、抑制mi R-21及沉默PDCD4对细胞分泌炎症因子IL-6及IL-10水平的影响。采用油红O染色检测RAW 264.7细胞泡沫化程度,并通过实时定量PCR检测各组细胞中mi R-21的表达水平,Western blot检测细胞中PDCD4蛋白水平。此外,高脂饲料喂养20只Apo E-/-小鼠建立AS模型,随机选取6只入组单纯高脂喂养AS模型组,并选用正常饲料喂养的7只C57BL/6小鼠作为正常对照组。余下14只AS模型小鼠按数字表法随机分成两组:过表达mi R-21组及阴性对照组(NC),通过鼠尾静脉注射法向两组小鼠尾静脉内分别注射胆固醇包裹的mi R-21激动剂(agomi R-21)及阴性对照agomi R-NC建立过表达mi R-21组及NC组。实时定量PCR检测mi R-21在AS斑块及正常动脉组织中的表达;Western blot及免疫组化分别检测PDCD4蛋白水平,免疫组化法检测AS斑块内IL-6及IL-10水平。结果:1、mi R-21、IL-6在急性STEMI患者血浆中的水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(p0.001;p0.001)。Logistic回归分析结果示年龄、男性为急性STEMI患者的独立危险因素,HDL-C升高为保护性因素。2、mi R-21在泡沫细胞中的水平较RAW 264.7细胞明显升高,差异有统计学意义(p0.01);PDCD4蛋白在泡沫细胞中的表达水平较RAW 264.7细胞明显升高。与空白对照组比较,ox-LDL组细胞上清液中促炎因子IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(p0.05)。与NC组比较,ox-LDL+mi R-21 mimics组及ox-LDL+si PDCD4组巨噬细胞泡沫化程度明显下降,且细胞上清液中IL-6水平明显降低,IL-10的水平明显升高,差异有统计学意义(p均0.05);ox-LDL+mi R-21 inhibitor组细胞泡沫化程度明显增加,细胞上清中IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(p0.05)。3、mi R-21在单纯高脂喂养AS模型斑块组织中的表达水平较C57BL/6小鼠动脉组织中明显升高(p0.01);PDCD4蛋白在单纯高脂喂养AS模型斑块组织中的水平较对照组明显升高。过表达mi R-21组AS斑块内PDCD4蛋白及IL-6水平较NC组明显减少,IL-10水平较NC组明显增多,且斑块较NC组明显减小。结论:1、mi R-21、IL-6在急性STEMI患者血浆中的水平明显升高。年龄、男性为急性STEMI患者的独立危险因素。2、mi R-21、PDCD4在泡沫细胞及AS斑块内的水平明显升高。促炎因子IL-6在泡沫细胞上清液及AS斑块内的水平较相应对照组明显升高,而抗炎因子IL-10水平降低。3、过表达mi R-21及沉默PDCD4可使细胞内促炎因子IL-6的分泌减少,抗炎因子IL-10增多,并可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。过表达mi R-21可以减少AS斑块内PDCD4及IL-6水平,增加IL-10水平,并可减小粥样斑块面积。说明mi R-21或可通过靶向调控PDCD4的表达,减轻炎症反应,从而减缓AS的发展,起到保护性作用。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R543.5

【参考文献】