环孢素A衰减肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙池操纵性钙内流

发布时间：2019-04-21 18:54

【摘要】：肺高压(Pulmonary Hypertension,PH)是一种渐进的、复杂的并且常常可以致命的基本病理过程。虽然其确切的发生机制仍不清楚,但各类型的肺高压都有一个共同特征即持续的肺血管收缩和血管重塑。无论是肺血管的收缩还是重塑都与肺动脉平滑肌细胞胞浆Ca2+浓度升高密切相关。先前研究证实在慢性低氧(Chronic Hypoxia,CH)与野百合碱(Monocrotaline,MCT)致PH模型大鼠中及肺动脉高压患者中钙池操纵性钙内流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)功能均有增强且胞浆钙浓度升高,同时钙调神经磷酸酶(Ca N)及活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFATc)被激活。本研究进一步在MCT致PH模型大鼠中观察SOCE功能何时增强,并采用Ca N的抑制剂环孢素A(cyclosporin A,Cs A)通过不同给药方式进行干预观察其对CH与MCT致PH模型大鼠SOCE功能的影响,为其可能成为临床上治疗PH的靶向药物提供病理生理学依据。第一部分环孢素A抑制两种肺高压大鼠模型的形成目的:观察CH及MCT致肺高压大鼠RVSP和RVMI随时间的变化,并使用Cs A通过不同给药方式干预观察其对两种肺高压大鼠时间点RVSP及RVMI的影响从而确定其如何抑制两种肺高压模型的形成。方法:①模型建立方法:健康雄性SD大鼠150-160g按50mg/kg一次性腹腔注射MCT后随机分为1、3、5、7、14、21d六组。每组进一步分为三小组,分别给予Cs A每天给药干预、隔天给药干预及空白对照组。健康雄性SD大鼠200-220g用相同的方法进行分组后暴露于低氧环境(氧浓度为10%)。正常组大鼠也进行相同的分组后常规饲养。②血流动力学检测方法:分别测定上述各组大鼠RVSP,测量完毕后取出心脏测定RVMI。结果:①MCT注射后的早期大鼠RVSP尚未升高,1w时高于正常对照组,随后呈时间依赖性升高直到3w(只描述所观察时间段内的变化),Cs A干预可抑制该模型1、2、3w时RVSP的升高,且每天给药较隔天给药抑制效果为显著。②CH致PH模型早期RVSP呈时间依赖性升高,1w时达峰值,随后稳定于该水平。Cs A干预无法抑制模型早期RVSP的升高,但能够显著降低这一模型的RVSP从第5d到第7d的增加幅度,并最终稳定于一低水平。③正常雄性SD大鼠给予Cs A,与正常对照组相比其RVSP及RVMI均无显著差异。④MCT致PH模型早期RVMI尚未升高,2w时显著高于正常水平,随后也呈时间依赖性升高直到3w。Cs A干预可显著抑制该模型2w、3w时RVMI的升高幅度,且每天给药几乎能够完全抑制这一模型右心室肥厚的形成。⑤CH致PH模型早期(1d后)RVMI即呈时间依赖性升高直到3w,Cs A干预可抑制相应时间点RVMI的升高幅度,且每天给药时能够完全抑制这一模型右心室肥厚的形成。⑥Cs A能够显著抑制两种模型肺血管重塑的形成。结论:①Cs A能够抑制上述两种肺高压模型的形成,且具有抑制右心室收缩压的升高及右心室肥厚的双重作用。②Cs A对两种模型右心室肥厚的抑制作用比在抑制RVSP升高中所起的作用更为显著。第二部分环孢素A衰减肺高压大鼠PASMCs[Ca2+]i的增加及SOCE功能的增强目的:观察MCT致PH模型大鼠PASMCs SOCE随时间的变化及Cs A对这两种模型大鼠PASMCs SOCE功能的影响。方法:在前已述及的建立模型的基础上,采用:①酶解法培养原代PASMCs;②fluo-3荧光检测[Ca2+]i方法及Mn2+淬灭fura-2荧光方法,分别测定CH3w及Cs A干预大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙内流量及Ca2+内流速率;③用上述同样的方法测定MCT注射后1、2、3w及正常对照组1、2、3w及相应时间点Cs A干预大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙内流量及Ca2+内流速率。结果:①成功培养各组大鼠PASMCs,且经免疫组织化学鉴定纯度在95%以上;②CH3w大鼠的PASMCs[Ca2+]i及由CPA诱导的钙内流量及Ca2+内流速率均显著高于正常水平,Cs A干预能够抑制其升高。③MCT注射后1w时大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙内流量已显著高于正常对照组,随后呈时间依赖性升高直到3w。同时其[Ca2+]i也呈时间依赖性增加。Cs A干预能显著降低相应时间点大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙跨膜内流量,每天给药较隔天给药有进一步降低的趋势。同时其也能够抑制胞浆钙浓度的增加。④正常对照组1、2、3w大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙内流量无明显改变,但Cs A每天给药能轻度升高这一指标。⑤MCT注射后1w时大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙内流速率已显著高于正常水平,随后呈时间依赖性升高直到3w。Cs A干预能显著降低相应时间点大鼠的PASMCs由CPA诱导的钙跨膜内流速率,每天给药较隔天给药有进一步下降的趋势,但无统计学差异。⑥正常对照组1、2、3w大鼠CPA诱导的PASMCs胞膜Ca2+内流速率及幅度无明显改变,但Cs A每天给药能轻度增加Ca2+内流速率及幅度。结论:1.MCT模型的形成过程中SOCE增强及胞浆钙浓度的增加均呈时间依赖性。2.Cs A能够抑制上述两种肺高压模型SOCE功能的增强及胞浆钙浓度的升高。3.Cs A能够轻度增强正常大鼠SOCE功能。综上所述,SOCE功能增强在CH及MCT致PH大鼠的发生发展中具有重要作用。SOCE功能增强可介导PASMCs胞浆钙浓度的升高,进而促进PA的收缩及重塑。Cs A干预可部分抑制该两种模型的形成。其可能机制为抑制这两种模型中的SOCE功能的增强。本实验结果为Cs A可能成为临床治疗PH的前景药物提供了病理生理学依据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李敬来;大鼠异位心脏移植模型的建立及其现状[J];上海实验动物科学;2001年03期

2 任志强,刘运良,刘丽君,王训凡,郭正科;三黄肾康丸治疗大鼠慢性肾衰的实验研究[J];中国药房;2001年01期

3 陈杰,王进海,龚均,汪涛,程鹏;药物干预治疗大鼠混合反流性食管炎的实验研究[J];基础医学与临床;2003年S1期

4 田新红,李伟,李成文,李增富;长期应用卡马西平对大鼠小脑结构与功能影响的实验研究[J];陕西医学杂志;2004年08期

5 马骏,朱书秀,王彦春,甘水咏;电针对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元凋亡的影响[J];上海针灸杂志;2005年10期

6 王冰;王宗仁;江山;潘惠娟;;活血化瘀类中药制剂对海马缺血损伤大鼠学习记忆的影响[J];中国临床康复;2005年48期

7 徐勤;沈逸萍;许安丽;罗振亮;;SD大鼠及beagle犬肾上腺组织形态计量分析[J];中国比较医学杂志;2006年07期

8 栗志远;陆国才;袁伯俊;姜华;戴益民;佘佳红;黄矛;;西那沙星对幼龄大鼠的软骨毒性[J];中国新药杂志;2006年04期

9 商常发;赵芝刚;顾有方;陈会良;李卫民;董策龙;;大枣多糖对大鼠血清钙和葡萄糖水平的影响[J];中国中医药科技;2007年02期

10 王毅;林伟;施举红;;野百合碱处理大鼠的血清对大鼠肺动脉压的影响[J];中国临床医学;2008年02期

相关会议论文 前10条

1 陈柏年;高梅;时丽丽;张恒艾;杜冠华;;匹诺塞林对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

2 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年

3 戴文鑫;吴智勇;;慢性阻塞性肺疾病大鼠模型血清胰岛素样生长因子-Ⅰ的变化[A];中华医学会第八次全国老年医学学术会议论文汇编[C];2007年

4 邝素娟;邓春玉;张光燕;饶芳;单志新;林秋雄;杨敏;余细勇;钱卫民;吴书林;;大蒜素对大鼠微血管张力的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

5 王劲;柳启沛;黄宗枝;;几种不同钙化合物对大鼠铝、铅代谢的影响(摘录)[A];营养健康新观察（第三十八期）：营养因素与骨髓健康[C];2009年

6 胡翔;王静;;雌性大鼠去势造模中设立假手术对照的必要性探讨[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年

7 齐伟;曾薇;庞琦;郭艳红;牟娇;冯兵;刘理;叶自林;袁发焕;;蛋白酶体抑制剂对大鼠糖尿病肾病的治疗作用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

8 梁锐;王军波;;核苷酸喂养大鼠的安全性评价[A];北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会论文集[C];2010年

9 林小琪;;SD大鼠灌胃百可利30天反复给药毒性试验[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年

10 王曦;牛欣;罗致诚;;增龄与雄性大鼠氮氧化物及血清性激素水平变化的关系[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 冯卫东;大鼠研究显示孕期压力或可代代相传[N];科技日报;2014年

2 奇 云;解读大鼠基因有助人类攻克疑难病症[N];大众科技报;2004年

3 张天行;克隆大鼠意义重大[N];中国医药报;2003年

4 本报特约撰稿人 陆志城;用大鼠还是用小鼠？[N];医药经济报;2004年

5 记者 蓝建中;日本研究:骨髓移植使大鼠血管“返老还童”[N];新华每日电讯;2010年

6 记者 姜澎;聪明大鼠 解密大脑记忆功能[N];文汇报;2009年

7 万姗姗　记者 王春;转基因“聪明大鼠”学得快记得牢[N];科技日报;2009年

8 记者 曹继军 颜维琦 通讯员 孙国根;大鼠基因功能图谱被成功绘制[N];光明日报;2014年

9 记者 白毅 通讯员 孙国根;大鼠基因功能图谱绘制成功[N];中国医药报;2014年

10 记者 孙国根;将大鼠基因的功能“对号入座”[N];健康报;2014年

相关博士学位论文 前10条

1 付德明;氯沙坦对慢性心力衰竭大鼠β_1肾上腺素能受体信号转导通路与心功能的调节及其机制研究[D];山西医科大学;2009年

2 杨少兵;N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基镇痛疫苗应用于大鼠的安全性评价[D];华中科技大学;2009年

3 盖建芳;低出生体重对大鼠肾脏和血压的影响及机制研究[D];中南大学;2009年

4 史敏;慢性间歇性低压低氧抗大鼠胶原诱导性关节炎作用及其免疫学机制[D];河北医科大学;2011年

5 安平;柴夏煎对甲亢大鼠的影响及作用机理研究[D];黑龙江中医药大学;2005年

6 周宜;从大鼠性周期的分子变化探讨柴胡止血液的作用[D];成都中医药大学;2005年

7 张庆红;白细胞介素2和雌激素受体在大鼠垂体前叶的相互关系研究[D];第四军医大学;2000年

8 张海峰;骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭治疗作用的实验研究[D];山东大学;2007年

9 常薪霞;盐酸小檗碱对高脂饮食诱导的SD大鼠非酒精性脂肪肝的疗效及机制研究[D];复旦大学;2010年

10 顼红雨;早期应激对海马学习、记忆功能的作用和机制研究[D];第三军医大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 李宁;铅、镉、铬、汞对大鼠听力的损伤及铜、锰、锌、硒的保护作用研究[D];山东大学;2008年

2 王莹;慢性肾衰竭大鼠全段甲状旁腺激素与心肌肌钙蛋白的相关性分析[D];山西医科大学;2008年

3 邓旭辉;养精种子汤对缺氧雄性大鼠生殖机能的影响[D];第三军医大学;2008年

4 夏长青;活血降脂灵对早期动脉粥样硬化大鼠的抗氧化应激作用研究[D];河北医科大学;2009年

5 王海燕;运动对SD大鼠与GK大鼠骨骼肌中COUP-TF Ⅰ与COUP-TFⅡ基因表达的影响[D];华东师范大学;2010年

6 吉星;知母提取物的成分分析及对T2DM大鼠干预代谢组学初探[D];广东药学院;2010年

7 曾志;促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经保护作用的研究[D];暨南大学;2011年

8 汪春彦;金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠的保护作用及其机制[D];安徽医科大学;2011年

9 王媛媛;胡芦巴总皂苷对大鼠脂肪肝的预防作用[D];新疆医科大学;2005年

10 徐莉;康复训练对脑梗死大鼠大脑可塑性机制的研究[D];第四军医大学;2002年

，

本文编号：2462466