去肾交感神经术对自发性高血压大鼠血压及肾纤维化的影响及其机制

发布时间：2020-03-24 15:12

【摘要】：背景:高血压已经成为全球重要的健康问题之一,全球约1/3成年人患高血压病,据估计,仅在2000年时,全球已有约9.72亿高血压人群,而到2025年时将增长至15.6亿。高血压可导致全身多个靶器官损害,而肾脏既是引起高血压的靶器官,也是高血压损害的靶器官,高血压可损伤肾组织的各个结构,包括肾血管、肾小球、肾小管间质。同时可引起足细胞的损伤与丢失、上皮间质的转化、肾小管间质的纤维化。因此高血压与肾损伤紧密联系,相互影响。近年来高血压肾病人发病率逐年上升,仅次于糖尿病肾病。研究表明高血压的发生发展除与传统高危因素有关,还与自身交感神经活动过度激活、氧化应激、RAS系统激活有重要关系。而去肾交感神经术(RDN)是近年来治疗高血压的重要手段之一,尤其对于顽固性高血压,常规药物治疗无效,RDN可产生一定的降压作用。因此本研究通过,探讨RDN术对自发性高血压大鼠的高血压和肾功能影响及其可能的机制。为后续临床研究提供理论和实验依据。研究方法:第一部分探讨苯酚的合适剂量建立去肾交感神经大鼠模型将12周龄SHR大鼠随机分为4组:对照组:生理盐水擦拭肾动脉。手术组:分别用10%苯酚0.5 ml,1ml,1.5ml擦拭肾动脉。每周无创尾动脉测血压,4周后,处死大鼠,收集血浆测去甲肾上腺素含量。肾动脉、肾神经行HE、Masson、PAS染色以及TH、NF200免疫组织化学染色。第二部分观察RDN对交感神经活性和氧化应激的影响以及RDN术后高血压和肾纤维化的变化情况。将12周龄SHR、WKY大鼠随机分为3组:对照组(SHR sham group)和手术组(SHR-RDN group、WKY-RDN group),术前及术后监测血压,20周后,处死大鼠,留取血浆、尿液、肾动脉、肾组织、下丘脑组织作进一步检测。第三部分:观察RDN对中枢ACE2表达影响,给予中枢ACE2激动剂DIZE和拮抗剂MLN-4760后,观察ACE2-Ang(1-7)-Mas轴变化情况,探讨高血压及肾纤维化的可能机制。将12周龄SHR大鼠随机分为4组:对照组(Sham group)和单纯RDN组(RDN group)、ACE2激动剂组(RDN+DIZE group)、ACE2抑制剂组(RDN+MLN-4760 group),在第13周时行RDN术和侧脑室灌注ACE2激动剂和拮抗剂,每周测动脉血压,4周后,处死大鼠,留取血浆、肾组织下丘脑组织作进一步检测。结果:第一部分:1.5ml苯酚组死亡1只大鼠,与肠梗阻有关。术后一月内,与对照组相比,1.5ml苯酚组收缩压逐渐增高(P0.01),而1ml苯酚组收缩压显著降低(P0.01),0.5ml组与对照组相比无统计学差异(P0.05)。肾组织NE含量:对照组、0.5ml组、1.5ml组比较无差异(P0.05),而1ml组明显降低(P0.01)。病理检查:对照组肾交感神经正常,0.5ml苯酚组轻度损伤,而1ml组、1.5ml组出现中度至重度损伤伴中度炎性细胞浸润及纤维化,核空泡化,核萎缩,同时部分神经细胞正常结构消失,肾动脉损伤评分分别为0.44±0.3 vs 3.46±0.3 vs 3.66±0.2,P0.01。表明1ml苯酚能够有效腐蚀肾交感神经,降低血压,降低肾组织中NE含量,成功建立RDN模型,对肾动脉无显著损伤。第二部分:与对照组相比,SHR-RDN组在术后第17周、21周、25周、29周时收缩压显著降低(P0.05),但第33周时血压逐渐升高,比较无差异(P0.05)。血浆PRA、Ang II、ALD、NADPH显著降低(P0.05),e NOS、NO、显著升高(P0.05)。24h蛋白尿显著降低(P0.001)。病理检测:SHR-RDN组较对照组肾小球硬化显著减轻,肾小球评分GS明显降低(P0.01);肾小管间质纤维化显著减轻,间质纤维化面积百分比降低(P0.01);下丘脑室旁核TH阳性细胞比例显著降低(P0.001)。表明采用1ml苯酚化学消融RDN术不能完全降低血压,只能延缓血压进展,同时RDN显著降低中枢及外周循环内交感神经活性和氧化应激。这可能是RDN延缓高血压进展,改善肾小球硬化小管间质纤维化的机制之一。第三部分:与对照组相比,RDN组收缩压显著降低。而与RDN组相比,RDN+DIZE组收缩压则进一步降低(168±8.1 vs 151.8±13.6,P0.05),RDN+MLN-4760组收缩压显著升高(168±8.1 vs 182.6±7.1,P0.05)。免疫荧光和WB:与对照组相比,RDN术后下丘脑PVN中ACE2、Mas明显表达上调(P0.05),而ACE1、AT1R明显下调(P0.05)。在给予中枢DIZE后,与RDN组相比,RDN+DIZE组下丘脑PVN中ACE2、Mas表达进一步上调(1.58±0.026 vs 1.76±0.027;1.57±0.026 vs 2.313±0.037,P0.05),而ACE1、AT1R进一步下调(P0.05);在RDN+MLN-4760组中,下丘脑PVN中ACE2、Mas表达进一步下调(1.58±0.026 vs 0.5±0.021;1.57±0.026 vs 1.195±0.015,P0.05),ACE1、AT1R表达上调。病理检测:与RDN组相比,RDN-DIZE组肾小球硬化显著减轻,GS明显下降(1.42±0.25 vs0.44±0.27,P0.05)。而RDN-MLN-4760肾小球硬化加重,GS明显增高(1.42±0.25 vs 1.65±0.30,P0.05)表明中枢激活ACE2能够降低血压,缓解肾小球硬化进展。结论:采用苯酚腐蚀神经法建立RDN大鼠模型,且RDN术可延缓SHR大鼠高血压进展,改善肾功能。其机制主要与抑制中枢交感神经活性、减轻氧化应激、上调下丘脑室旁核内ACE2表达有关。
【图文】：

正态分布,苯酚,收缩压,组间

若符合正态分布且方差齐，用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单方差分析，组间多重比较采用 LSD-t 检验，，等级资料比较采用非参数检ruskal-Wallis H 法，P<0.05 有统计学意义。.5 结果.5.1 存活率1.5ml 苯酚组术后第 9 天死亡 1 只大鼠，死因为腹腔感染，肠梗阻；其他无死亡。.5.2 各组大鼠收缩压 RDN 术前与术后的变化术前，SHR 大鼠基线血压各组间无显著差异（P > 0.05），RDN 术后 1 周术组包括 0.5ml、1ml、1.5ml 苯酚组，较对照组明显降低（P < 0.01）。术后内，1.5ml 苯酚组较对照组收缩压逐渐增高（P < 0.01），而 1ml 苯酚组显著（P < 0.01），0.5ml 苯酚组与对照组相比无统计学差异（P>0.05）。（见图 1

苯酚,肾组织,肾动脉,中膜平滑肌

图 1-2 不同剂量苯酚 RDN 术对肾组织 NE 含量的影响1-2 Effect of RDN with different dose of phenol on renal NE in * P < 0.01 vs sham group对肾动脉损伤评估左侧肾动脉进行HE，Masson，PAS染色后发现：对组动脉内膜未见明显增生，血管内皮及内膜下弹力膜明显增厚并向管腔突出，血管内皮细胞脱落，平滑，中膜平滑肌增生，血壁破坏伴炎症细胞浸润（见图5ml苯酚组中重度损伤，其余各组正常至轻度损伤。（肾交感神经形态学变化色下，对照组为肾交感神经正常，0.5ml 苯酚组肾交润，神经束外膜破裂不完整，而 1ml 组、1.5ml 组肾浸润及纤维化，核空泡化，核萎缩，同时部分神经细
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R544.1

【参考文献】