【摘要】：背景与目的已明确肾血管性高血压发病与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)密切相关,同时也发现肾血管性高血压大鼠血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)明显增高,但MMP-9在肾血管性高血压发病中的作用尚不清楚。本研究通过JNJ0966特异抑制肾血管性高血压大鼠模型MMP-9的表达,观察MMP-9表达的抑制对模型的血压水平和心血管重构的影响,探讨MMP-9在肾性高血压发病机制中的作用。实验方法造模:44只SPF级8周龄雄性Sprague Dawley大鼠随机分成假手术(8只),双肾双夹肾血管性高血压造模(36只)。术前禁食12小时,不禁水,行无创尾动脉测血压、称重、10%水合氯醛麻醉、开腹。造模组采用银夹缩窄双侧肾动脉,假手术组不缩窄双侧肾动脉。术后连续肌肉注射青霉素3天预防感染。术后第14天,再次尾动脉测压,以血压水平确定造模是否成功。2.实验分组:将造模成功的大鼠随机分3组:模型组、低剂量组、高剂量组,取同等数量的假手术大鼠作为假手术组。从造模失败的大鼠中选取伴肾固缩的大鼠作为造模失败组。3.实验方法:假手术组和模型组大鼠每天给予溶剂(20%的β-羟丙基-环糊精)lml灌胃,每天1次;低剂量组和高剂量组分别以10mg/kg和30mg/kg的JNJ0966溶于溶剂中1ml灌胃,每天1次。在干预的第8天,重测血压,然后处死大鼠。取左心室,计算左室重量指数(LVWI=左室重量/体重);左室心肌组织切片HE染色观察心肌间质和心肌细胞的改变;取肠系膜上动脉和腹主动脉切片HE染色观察并计算动脉壁腔比,马松三色染色法(Masson)观察内膜中层胶原纤维面积占比(即胶原容积分数,CVF)。免疫印迹法(Western blotting)检测心肌组织MMP-9水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清MMP-9、AngⅡ水平;尿素酶-谷氨酸脱氢酶法测定血清尿素氮,肌氨酸氧化酶法测血肌酐,酶循环法测血清半胱氨酸。结果1.造模及分组情况:术后第2周末,假手术组的8只大鼠血压值[(112.094±8.189)mmHg],双肾双夹组有18只血压值升高[(149.45±8.340)mmHg],达到高血压诊断标准,造模成功;其余11只造模失败的血压值为[(109.369±9.227)mmHg],其中6只伴有肾固缩的造模失败大鼠血压为[(108.536±6.412)mmHg。有7只大鼠分别于术中术后死亡。分组结果是:假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组、造模失败组(伴有肾固缩的造模失败大鼠)各6只。2.MMP-9特异性抑制剂明显降低肾血管性高血压大鼠的血压水平与模型组[(171.107±15.61)mmHg]比,低剂量组[(138.961±2.741)mmHg]、高剂量组[(133.882±10.54)mmHg]血压明显下降(P0.05),但仍明显高于假手术组[(114.189±8.495)mmHg](P0.05),高剂量组与低剂量组之间则无显著性差异(P0.05)。3.MMP-9特异性抑制剂明显改善肾血管性高血压大鼠的心室重构模型组 LVWI[(2.7678±0.401)mg/g]、心肌细胞横截面积(3294.17±520.53)明显高于假手术组[分别为(1.844±0.129)mg/g、(1653.50±261.37)](P0.05),心肌纤维断裂。与模型组比低剂量组[分别为(2.278±0.243)mg/g、(1848.83±293.83)]、高剂量组[分别为(2.219±0.233)mg/g、(1656.17±324.61)]这两项指标明显下降(P0.05),心肌纤维破坏明显改善,但低剂量组和高剂量组两者间差异不显著(P0.05)。造模失败组LVMI[(2.086±0.206)mg/g]与假手术组无明显差异(P0.05)。4.MMP-9特异性抑制剂明显改善肾血管性高血压大鼠的血管重构与假手术组比模型组肠系膜上动脉壁腔比明显增大[(0.876±0.197)vs(1.127±0.275)],腹主动脉胶原容积分数明显减小[(55.103±13.663)vs(41.491 ± 7.603)%](P0.05)。与模型组比,低剂量组(0.825±0.215)和高剂量组(0.853±0.053)肠系膜上主动脉壁腔比明显减小(P0.05),腹主动脉胶原容积分数明显回升[分别为:54.083±5.154)%,(60.072±11.731)%],但低剂量组和高剂量组两者间差异不显著(P0.05)。肠系膜上动脉CVF和腹主动脉壁腔比在各组之间差异不显著(P0.05)。5.肾血管性高血压大鼠心肌组织MMP-9蛋白水平升高,MMP-9特异性抑制剂明显降低MMP-9的表达量与假手术组比,模型组心肌组织中MMP-9蛋白水平明显增高[(0.120±0.230)vs(3.941±1.904)](P0.05)。经干预后,与模型组比,低剂量组(0.153±0.127)和高剂量组(0.003±0.005)心肌组织中MMP-9蛋白水平均明显降低(P0.05),而与假手术组相似(P0.05),其中高剂量组也比低剂量组明显低(P0.05)。6.肾血管性高血压大鼠血清MMP-9、AngⅡ水平升高,MMP-9特异性抑制剂明显减低其水平与假手术组比,模型组血清MMP-9、AngⅡ水平均明显增高[分别为:(20.036±5.989)vs(37.831± 16.703)ng/ml,(21.575±4.746)vs(27.567±4.716)pg/ml](P0.05)。经干预后,与模型组比,低剂量组和高剂量组血清中MMP-9[分别为:(21.715±4.660),(21.890±9.029)ng/ml]、AngⅡ[分别为:(22.032±5.180),(19.151±3.347)pg/ml]水平均明显降低(P0.05)而与假手术组相似(P0.05)。低剂量组和高剂量组之间则差异不明显(P0.05)。7.肾血管性高血压大鼠血清血肌酐、尿素氮、同型半胱氨酸无明显异常与假手术组比,模型组血肌酐、尿素氮以及同型半胱氨酸无明显差异,低剂量组、高剂量血尿素氮和血肌酐与假手术组比有所增高[分别为:(6.843±1.820);(6.634± 1.100)vs(4.587±0.808)mmol/L,(38.333±6.218);(39.00±3.00)vs(28.667±6.408)umol/L](P0.05)。而伴肾固缩的造模失败组大鼠血尿素氮、肌酐和同型半胱氨酸比假手术组及模型组均明显增高[分别为:(7.670±0.963)vs(4.587±0.808)和(5.595± 1.222)mmol/L;(40.33±4.590)vs(28.667±6.408)和(30.333±6.831)umol/L;(10.275±1.142)vs(8.010±1.602)和(8.022±0.713)μmol/L](P0.05)。结论特异性抑制MMP-9的表达可以明显降低肾血管性高血压大鼠的血压及改善心血管系统的重构,MMP-9升高可能是肾血管性高血压的发病机制之一。
【图文】：
实验流程图
分别以假手术组、造模成功组、和造模失败组命名。各组术前基础血压、逡逑术后血压、术前术后血压差值平均值见下表。各组大鼠血压在造模前无明显差异逡逑（Ｐ＞0．0５）。造模成功组血压在术后明显高于假手术组ＣＰ＜０．０５，表１，图２）。逡逑表１各组大鼠的收缩压水平（Ｓ±ｓ，，ｍｍＨｇ）逡逑Ｔａｂｌｅ邋１邋ｓｙｓｔｏｌｉｃ邋ｂｌｏｏｄ邋ｐｒｅｓｓｕｒｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｒａｔｓ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ（邋ｘ±ｓ，ｍｍＨｇ邋）逡逑ｍ＼邋例数（只）￣￣术前血压逦术后血压逦差值平均值逡逑逦（术后－术前）逡逑假手术组逦８逦１１１．０９３±１０．３４０逦１１２．０９牡８．１８９逦１．００１逡逑造模成功组逦１８逦１１０．３８３±１０．０９５逦１４９．４５±８．３４０ａｂ逦３９．０７３逡逑造模失败组逦６逦１０６．７０１±７．８５５逦１０８．５３６±６．４１２逦１．８３５逡逑６逡逑
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R544.1
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