ACE2内源性激动剂对糖尿病心肌病的保护作用及可能机制探讨

发布时间：2020-03-28 15:52

【摘要】：目的:1、探讨乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(Diminazene aceturate,DIZE)做为新型的血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)激动剂,是否可以内源性的激动ACE2。2、观察DIZE对糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用,并探讨其可能机制。方法:1、动物模型建立:健康的雄性Wistar大鼠46只,体重约180-200g。将大鼠随机分成正常对照组12只和造模组34只。适应性喂养7天,予以造模组大鼠禁食12 h处理后腹腔一次性注射链脲佐菌素65 mg/kg,正常组大鼠腹腔注射相等剂量的柠檬酸盐缓冲液做对照处理。注射三天后检测造模组各只大鼠血糖,血糖大于16.7mmol/L者则造模成功。并将造模成功的大鼠随机分成DCM组和DIZE治疗组。喂养12周后分别给予治疗组DIZE 15mg/kg/d,DCM对照组予以等量生理盐水处理4周。16周末麻醉后行超声检测并摘取心肌组织。2、大鼠血糖及体重测定:分别在造模之前,造模成功后及取材之前对各组大鼠进行体重和血糖的测定。3、心功能检测:16周末予以各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛3ml/kg进行麻醉,麻醉后使用超声检测各组大鼠的心功能。4、ELISA法检测大鼠心肌中AngⅡ和Ang(1-7)的含量:应用ELISA试剂盒测定各组大鼠心肌组织中AngⅡ和Ang(1-7)含量。5、Masson染色法观察心肌纤维化情况6、免疫组织化学染色:将组织进行石蜡包埋并切片,进行collegenⅠ,collegenⅢ,CTGF,IL-1和IL-6免疫组织化学染色。7、Real-time PCR:进行collegenⅠ,collegenⅢ,CTGF基因的荧光定量检测。8、免疫印迹法(Western blot):取大鼠心肌组织提取总蛋白,电泳检测心肌中ACE2蛋白的表达,ERK1/2通路的激活情况。结果:DIZE治疗后糖尿病大鼠心肌中的ACE2蛋白表达显著增加,AngⅡ含量降低,Ang(1-7)含量升高。DIZE治疗组与糖尿病模型组比较胶原含量及L-1,IL-6显著下降。与正常组比较,糖尿病心肌病组E/A、EF、FS明显下降,DIZE治疗组较DCM组E/A、EF、FS明显改善。DCM组与N组比较,ERK的磷酸化明显增加,治疗组则减轻了这一变化。结论:ACE2内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒显著提高了ACE2的活性,并可能通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴,激活ERK1/2通路进而改善糖尿病大鼠心功能,抑制心肌纤维化,炎症及凋亡的发展。从而对糖尿病心肌病大鼠心功能起到保护性作用。
【图文】：

HE染色,心肌纤维,横截面积,心肌断裂

3 心肌病理改变通过 HE 染色观测各组大鼠心肌形态。正常组大鼠的心肌细胞致密整齐，少见肌纤维溶解。DCM 组大鼠心肌细胞明显肥大，，并出现心肌纤维断裂和坏死。DIZE 组与 DC组比较心肌断裂、坏死程度减轻，心肌纤维形态较完整。DCM 组心肌横截面积明显大于正常组( P ＜ 0.05)，DIZE 治疗组横截面积与 DCM 组比较明显减小( P ＜ 0.05)。见图 1。

均匀分布,胶原纤维,蓝色,肌纤维

Figure 1． Myocyte cross-sectional area. *P ＜ 0. 05 vs N group; #P ＜ 0. 05 vs DCgroup．4 各组大鼠心肌纤维化指标检测4.1 Masson 染色Masson 染色后，切片中心肌纤维呈现红色，而胶原纤维被染成蓝色。正常组大鼠心肌中蓝色胶原纤维呈少量均匀分布。糖尿病心肌病组大鼠心肌间质及血管周围胶原纤维表达明显增加，胶原含量相对于正常组差异有统计学意义( P ＜ 0.05) 。DIZ治疗组经过治疗后，心肌间质胶原纤维明显减少( P ＜ 0.05)。见图 2。
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R542.2

【参考文献】