Nox4通过NLRP3信号通路参与Hcy诱导的内皮细胞凋亡

发布时间：2020-03-31 06:48

【摘要】：背景同型半胱氨酸((Homocysteine,Hcy))是心血管疾病的独立危险因子之一。Hcy能够诱导细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的生成增多引起内皮损伤从而导致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)发生发展。内皮细胞中ROS主要来源于Nox4(NADPH oxidases 4)。NLRP3在冠状动脉粥样硬化及主动脉硬化中高表达。NLRP3是AS中IL-1家族细胞因子产生的关键介质,特别是当细胞内产生的大量ROS,可导致caspase-1前体大量剪切成具有生物活性的caspase-1 P10片段,推动下游IL-1β和IL-18等炎症因子的成熟及分泌,使内皮细胞功能受损,引起细胞炎症损伤及凋亡,正反馈加重血管损伤。本文主要探讨Nox4在Hcy介导的内皮细胞炎症及凋亡的作用,Hcy导致的AS提供可能的机制。目的探讨Nox4调控NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路在Hcy诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡中的作用。方法1.体外培养HUVECs。用不同浓度Hcy处理HUVECs,筛选合适的诱导浓度;2.分组进行细胞实验,分为阴性对照组(NC)、Hcy处理组(NC+Hcy)、siNox4组(siNox4)、siNox4+Hcy组(siNox4+Hcy);3通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,DHE染色检测超氧自由基,应用脂质体法转染siRNA干扰抑制Nox4;Western blot检测各组细胞Nox4、NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白的表达,TUNEL检测细胞凋亡。结果1.Hcy刺激下HUVECs的Nox4表达增加,细胞内超氧自由基增多,增强氧化应激反应,同时引起蛋白复合物炎症小体NLRP3、caspase-1、IL-1β表达增加,引起细胞凋亡。2.siRNA干扰抑制Nox4后,Hcy刺激下HUVECs的NLRP3、caspase-1、IL-1β表达明显降低,细胞凋亡减少。结论Hcy刺激Nox4表达增加而激活NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路介导细胞凋亡。
【图文】：

图 1：不同浓度的 Hcy 对 HUVECs 细胞凋亡的影响(Annexin V+／PI-、Annexin V+／PI+)框中细胞为凋亡细胞。A～F 分别为空白对照0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.5mmol/L。N=3/组。y 可以引起内皮细胞活性氧的增加，从而导致内皮损伤通过 DCFH-DA 法测定活性氧（H2O2）的表达，如图 2 所示，，在 Hcy（0.2mm

图 2. Hcy 可以引起内皮细胞活性氧的增加，从而导致内皮损伤激内皮细胞产生炎症反应.2mmol/L）刺激内皮细胞 24h，检测 Nox4、Nox2、NLRP3达水平，结果显示：与 Control 组相比，Hcy 组 Nox4、No
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5

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本文编号：2608723