阻断SHH信号通路对MDS细胞增殖抑制与诱导凋亡的实验研究

发布时间：2020-04-01 00:39

【摘要】：目的:研究SMO抑制剂(Jervine)对MDS细胞株MUTZ-1作用效果,囊括对Shh通路活性、细胞增殖、凋亡、周期、基因水平、蛋白水平的影响。方法:应用CCK8法检测加入不同浓度Jervine前后MDS细胞株MUTZ-1的增殖变化。应用流式细胞术检测加入不同浓度Jervine前后MDS细胞株MUTZ-1的凋亡及周期的变化。应用Western blot法检测Jervine作用于MDS细胞株MUTZ-1前后Shh信号通路效应蛋白Bcl2、CyclinDl的蛋白水平的变化。应用荧光实时定量PCR法检测正常人细胞及MUTZ-1细胞株SMO基因表达水平,及Jervine作用于MDS细胞株MUTZ-1前后Shh通路中Smo、Gli1的基因表达水平。结果:MUTZ-1加入Jervine后MUTZ-1细胞增殖率有不同程度下降、MUTZ-1细胞凋亡率有不同程度的上升。加入不同浓度Jervine后G1期细胞所占比重增多,S期细胞减少,表明Jervine可使MUTZ-1细胞周期阻滞于G1期,抑制了细胞的增殖。加入Jervine后Smo、Gli1基因表达水平及Bcl2、CyclinDl蛋白水平有所下降,Jervine在基因水平、蛋白水平都可以抑制Shh信号通路的相关基因。结论:SMO抑制剂作用于MDS细胞株MUTZ-1后,抑制细胞的增殖,增加其凋亡率,下调Shh信号通路下游靶基因表达。Shh信号的活化参与了MDS的发生、发展,Shh信号通路的活化对MDS发生及发展起重要作用。SMO抑制剂可抑制Shh信号通路相关基因的表达,证实了SMO抑制剂对Shh信号通路的抑制作用,进而为骨髓增生异常综合征治疗提供了一个新的思路。
【图文】：

细胞株,正常人,基因表达,增殖率

图2 MUTZ-1细胞株与正常人SMO基因表达比较Fig.2 Comparison of SMO gene expression between mutz-1 cell line and normal subje SMO抑制剂对MUTZ-1细胞生长的影响用 CCK8 法检测 MUTZ-1 细胞加入 SMO 抑制剂(Jervine)后增殖率，以不制剂细胞作为对照组。对照组增殖率为100%，加入1um Jervine增殖率为93.入 5um Jervine 增殖率为 87.9%，加入 10um Jervine 增殖率为 78.8%。各个对照组相比均有统计学意义，p＜0.001。三个浓度相比：P＜0.001。表明不制剂浓度对细胞增殖率有不同程度抑制，，随着抑制剂浓度加大增殖率有明。表明 SMO 抑制剂可抑制 MUTZ-1 细胞的生长。

抑制剂

图3不同浓度SMO抑制剂对MUTZ-1细胞生长的影响Fig.3 Effects of SMO inhibitors at different concentrations on mutz-1 cell growthO 抑制剂对 MUTZ-1 细胞凋亡率、周期的影响MUTZ-1凋亡率的影响流式检测 MUTZ-1 细胞加入 SMO 抑制剂(Jervine)前后凋亡率，以不加抑制剂为对照组。不加抑制剂凋亡率为 3.29%，加入 1umJervine 凋亡率为 5.74%，加 Jervine 凋亡率为 10.77%，加入 10um Jervine 凋亡率为 17.89%。各个浓度同相比均有统计学意义，p＜0.001。三个浓度相比：P＜0.001。显示细胞凋亡率vine 剂量成正相关。表6加入不同浓度SMO抑制剂MUTZ-1细胞凋亡率的变化Table 6 Changes of apoptosis rate of MUTZ-1 cells with different concentrations of SMOinhibitor were added组别凋亡率
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R551.3

【参考文献】