血友病A患者内含子22和内含子1倒位的检测及方法对比

发布时间：2020-04-22 22:50

【摘要】：目的:使用长距离PCR(long-distance polymerase chain reaction,LD-PCR)及巢式PCR(reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-NPCR)方法检测山西地区血友病(hemophilia A,HA)患者内含子22(intron 22 inversion,Inv22),使用双管多重PCR方法检测内含子1倒位(intron 1 inversion,Inv1),了解其发生率,并改进和完善实验方法。方法:选取在山西省血友病管理中心登记的HA患者,使用LD-PCR方法对105例HA患者进行Inv22检测,RT-NPCR方法对39例HA患者进行Inv22检测;使用双管多重PCR方法对77例HA患者进行Inv1检测。结果:使用LD-PCR检测HA患者105例,其中30例(28.6%)扩增成功,Inv22阳性者16例(53.3%);使用RT-NPCR检测HA患者39例,其中30例扩增成功(76.9%),Inv22阳性者9例(30.0%),其中有7例同时使用LD-PCR及RT-PCR检测,两种方法检测结果一致;使用双重多管PCR检测HA患者77例,全部扩增成功(100.0%),其中Inv1阳性者2例(2.5%)。以本课题组前期已确诊Inv22和Inv1阳性的患者做为阳性对照,以正常人作为阴性对照。结论:(1)山西地区HA患者Inv22及Inv1发生率基本与国内外研究报道符合;(2)目前LD-PCR为检测Inv22的标准方法之一,但扩增效率较低。RT-NPCR与LD-NPCR方法检测相同HA患者,结果一致,但RT-NPCR成功率更高,且耗时短,更经济,很有可能成为检测Inv22更有效的方法之一。
【图文】：

arker； 阴性对照h1 体系，A2:inth2 体系； 阳性对照h1 体系，B2:inth2 体系； 阴性h1 体系，，C2:inth2 体系； 阳性h1 体系，D2:inth2 体系图 3：双管多重 PCR 检测 Inv1 凝胶电泳图DNA 测序验证 RT-NPCR 扩增位置结果-NPCR 野生型体系测序结果见图 4，结果显示，扩增位置为 FⅧ基因编码区；突变型体系测序结果见图 5，结果显示，扩增位置为 FⅧ基因 Inv22 后的部分 22 号内含子。两体系扩增位置均正确。

RT-NPCR野生型体系测序结果
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R554.1

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本文编号：2637055