MDS患者骨髓巨噬细胞与红系生成相关性的研究

发布时间：2020-04-27 14:14

【摘要】：目的:通过分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓巨噬细胞所占比例及其极化状态,并分析其与Th细胞活化、红系分化与凋亡的关系,探讨巨噬细胞在MDS发病机制中的作用及意义,为MDS贫血的治疗提供新思路。方法:运用流式细胞术检测骨髓增生异常综合征患者与正常人骨髓巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞比例。并运用免疫组化、实时荧光定量PCR对流式结果进行验证。酶联免疫吸附实验检测骨髓液上清IFH-γ、IL-4浓度。流式细胞术检测Th细胞极化。流式细胞术检测骨髓有核红细胞分化及凋亡。分析MDS患者骨髓巨噬细胞与预后相关因素的相关性。并对MDS患者骨髓巨噬细胞与Th细胞极化、红系分化与凋亡的相关性进行分析。结果:(1)低危MDS患者骨髓巨噬细胞比例显著高于正常对照以及高危MDS患者,并且MDS患者M1型巨噬细胞比例与Th1细胞百分比呈现出正相关性;(2)低危MDS患者骨髓巨噬细胞出现异常极化,偏向于M1型巨噬细胞;(3)低危MDS患者CD45-细胞中,CD71~+CD235a~+细胞百分比与CD71~(int)CD235a~+百分比之比高于正常对照以及高危MDS患者,存在幼红细胞分化阻滞,并且阻滞程度与骨髓巨噬细胞比例呈正相关;(4)低危MDS患者有核红细胞凋亡率显著增加,并且与M1型巨噬细胞占总巨噬细胞的百分比(M1%)呈正相关;(5)外周血血红蛋白浓度与骨髓巨噬细胞比例呈负相关。(6)MDS患者骨髓巨噬细胞比例与IPSS积分呈负相关。(7)MDS患者骨髓巨噬细胞比例与骨髓CD34+细胞比例呈负相关。结论:巨噬细胞参与MDS异常免疫过程,低危MDS患者骨髓巨噬细胞比例增加并出现异常I型极化。骨髓巨噬细胞异常免疫状态对红系造血的负面影响可能是低危MDS患者贫血的原因之一。MDS患者骨髓巨噬细胞比例与IPSS积分及CD34+细胞比例呈负相关,或可提示疾病进展程度和评估预后。
【图文】：

流式细胞术,比例,缓冲液,避光

去上清。加入 1ml 破膜液，4℃避光反应 15 分钟。加入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分钟 5 分钟，去上清。加入 5μl CD68-PerCP/Cy5.5 抗体 5μl，4℃避光反应 30 分钟。加入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分钟 5 分钟，去上清。加入 200μlPBS 缓冲液重悬细胞，上机检测。设门方式及分析如图Flowjo 软件分析结果。

Th细胞,流式细胞术,离心机,缓冲液

入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分5 分钟，去上清；1ml 固定液，混匀，4℃避光反应 15 分钟；入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分5 分钟，去上清；1ml 破膜液，混匀，4℃避光反应 15 分钟；入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分5 分钟，去上清；IFN-γ/IL-4 mix 抗体 7μl，4℃避光孵育 30 分钟；入 2ml 含 1% BSA 的 PBS 缓冲液，水平离心机 1500 转/分5 分钟，去上清；200μlPBS 重悬细胞，，上机检测。以 Flowjo 软件分析结果。设2）。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R551.3

【参考文献】