巨噬细胞CCL20和IL-17的调控机制及其与冠心病的关系研究

发布时间：2020-04-29 00:18

【摘要】：研究背景:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病和卒中的主要原因,其基本病理特征是炎症反应、氧化修饰和脂质沉积。单核/巨噬细胞在动脉粥样硬化复杂的发病机制中具有显著的活性,通过黏附分子、趋化因子、肿瘤坏死因子等炎症因子激活、招募进入AS斑块,加速AS的病理进程。趋化因子是免疫监视和炎症过程中白细胞转运的重要调节因子。影响初始炎症应答的因素如自由基的产生、NF-κB通路的激活、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放以及补体的激活等可能直接或间接的诱导趋化因子的合成。趋化因子CCL20及其受体CCR6由于特异的配对关系,因此被称作CCL20-CCR6轴,目前认为该趋化因子轴主要通过作用单核细胞,介导其离开骨髓并募集至血管壁而调节动脉粥样硬化进程。炎症因子IL-17目前被认为主要由Th17细胞分泌且主要受CCL20-CCR6轴调控。然而,CCL20和IL-17在巨噬细胞中的调控机制尚无阐述,在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者中的表达及与冠心病的关系亦鲜有有报道。研究目的:以小鼠RAW264.7细胞和中国冠心病患者为研究对象,探讨CCL20及IL-17在巨噬细胞中的调控机制及其与冠心病之间的关系。研究方法:第一部分:1.oxLDL以不同作用浓度和时间诱导RAW264.7细胞建立模型,检测CCL20及IL-17表达水平;2.阿托伐他汀干预oxLDL诱导的RAW264.7细胞模型并检测CCL20及IL-17表达水平;第二部分:1.在oxLDL诱导模型和阿托伐他汀干预模型中特异性抑制NF-κB活性,检测CCL20及IL-17表达水平;2.构建CCL20过表达质粒,转染RAW264.7细胞使CCL20过表达,检测NF-κB活性及对IL-17的分泌的影响;3.采用AKT特异性抑制剂和激动剂干预RAW264.7细胞,检测下游NF-κB活性及CCL20、IL-17的表达;第三部分:1.入选急性心肌梗死、稳定性心绞痛、冠脉造影正常共206例患者,ELISA 检测血清 CCL20 及 IL-17 浓度,RT-PCR 检测 PBMCs 中 CCR6 mRNA 水平;2.分析血清CCL20及IL-17浓度、CCR6 mRNA水平与冠脉狭窄严重程度关系及在冠心病中的诊断价值,logistic回归分析冠心病危险因素。研究结果:1.oxLDL刺激RAW264.7可诱导CCL20的mRNA、蛋白水平上调及IL-17的分泌增加,且与oxLDL刺激呈浓度及时间依赖性;2.阿托伐他汀可使oxLDL诱导的RAW264.7细胞中CCL20、IL-17的表达减少,且呈浓度依赖性;3.NF-κB通路参与CCL20及IL-17的调控;4.RAW264.7细胞CCL20过表达亦可激活NF-κB活性,且调控IL-17分泌;5.AKT可能作为NF-κB信号通路的上游调节CCL20及IL-17的表达;6.急性心肌梗死及稳定性心绞痛患者血浆CCL20、IL-17水平及PBMCs中CCR6 mRNA水平较冠脉造影正常患者明显升高;CCL20、CCR6、IL-17三者呈正相关,且与冠脉狭窄严重程度密切相关;血浆CCL20、IL-17浓度在冠心病中具有良好的诊断价值;血浆CCL20、IL-17浓度水平是冠心病独立相关因素。总结:1.AKT/NF-κB/CCL20/IL-17信号通路可能是巨噬细胞参与动脉粥样硬化发生发展中的重要信号通路;2.oxLDL及阿托伐他汀能干预RAW264.7细胞中AKT/NF-κB信号通路的活性,并调控CCL20及IL-17的表达;3.CCL20过表达亦可反馈性增强NF-κB活性,进一步增强CCL20的促动脉粥样硬化作用;4.CCL20、IL-17浓度与冠脉狭窄严重程度密切相关,在冠心病诊断中具有一定价值;5.CCL20、IL-17是冠心病新的独立相关因素。
【图文】：

逑分别使ＣＣＬ２０ｍＲＮＡ上调３．７倍、５．０倍，差异均有显著性（Ｆ＝３５８．１８，邋Ｐ＜０．００１，逡逑见图１－１）。ＷＢ结果显示ｏｘＬＤＬ可诱导ＲＡＷ２６４．７细胞中ＣＣＬ２０蛋白的表达上逡逑调，且呈浓度依赖性；与Ｏｕｇ／ｍｌ组相比，２０ｕｇ／ｍｌ、４０ｕｇ／ｍｌ的ｏｘＬＤＬ诱导组分逡逑别使ＣＣＬ２０蛋白上调４．３倍、５．８倍，差异具有显著性（Ｆ＝８６．２６，邋Ｐ０．００１，见逡逑图１－２）。ＥＬＩＳＡ结果显示ｏｘＬＤＬ可诱导ＲＡＷ２６４．７细胞分泌ＣＣＬ２０及ＩＬ－１７增逡逑加，呈浓度依赖性（见图１－３、１－４，表１－１）。逡逑％逦１５０－１逡逑２逡逑Ｃ逦＊逡逑．２逦１００－逦ＭＭ，逡逑ｍ逦＊逡逑ｉ逦逦逡逑ｓ逦ｎ逡逑Ｏ逦ｉｃ逦＝＝＝：：：：：逡逑ｇ邋５０－逦

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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 王伟;张旗;庞艳梅;邸书华;甄利波;;趋化因子在动脉粥样硬化中的作用机制[J];临床荟萃;2009年11期

2 Seon Hee Chang;;A novel heterodimeric cytokine consisting of IL-17 and IL-17F regulates inflammatory responses[J];Cell Research;2007年05期

本文编号：2644023