TM6SF2在oxLDL诱导的人血管平滑肌细胞脂质蓄积中的作用及机制

发布时间：2020-05-04 18:48

【摘要】：【目的】探讨跨膜6超家族成员2(transmembrane 6superfamily member 2,TM6SF2)蛋白在人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中的表达情况,以及TM6SF2在VSMC脂质蓄积的影响及分子机制。【方法】(1)免疫荧光方法检测体外培养的人VSMCs中TM6SF2表达情况;分别采用0、10、25、50、75μg/ml的oxLDL处理VSMCs 24 h或50μg/ml oxLDL处理VSMCs 0h、12h、24h、48h,实时定量PCR和Western Blot检测细胞TM6SF2 mRNA和蛋白质的表达变化。(2)分别以TM6SF2过表达慢病毒、TM6SF2 siRNA转染VSMCs,再加oxLDL或Dil-oxLDL处理,油红O染色检测细胞中脂质,荧光显微镜观察细胞对Dil-oxLDL的摄取情况,总胆固醇试剂盒检测细胞内总胆固醇的含量;实时定量PCR、Western blot检测细胞上脂质摄取受体Lox-1和CD36的表达。(3)取人尸检冠状动脉前降支动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块,采用免疫组织化学方法检测TM6SF2在人As斑块中的表达分布情况,免疫荧光双标技术检测TM6SF2与VSMCs在人As斑块中的共定位情况。【结果】(1)免疫荧光检测结果显示,TM6SF2在体外培养的人VSMCs中有阳性表达,主要分布在细胞胞浆中;实时定量PCR和Western Blot结果显示oxLDL呈浓度和时间依赖性上调VSMCs中TM6SF2 mRNA和蛋白质表达。(2)油红O染色结果显示,与oxLDL单独处理组相比,TM6SF2过表达组细胞内红色脂滴明显减少,而TM6SF2低表达组细胞内红色脂滴明显增多;荧光显微镜观察结果显示,TM6SF2过表达组VSMCs摄取的Dil-oxLDL较oxLDL单独处理组增加,TM6SF2低表达组则减少;总胆固醇分析结果也显示,TM6SF2过表达组VSMCs中总胆固醇含量降低,而TM6SF2低表达组细胞中总胆固醇含量则增加;实时定量PCR和Western Blot结果则显示,与oxLDL单独处理组相比,TM6SF2过表达组VSMC中LOX-1和CD36 mRNA和蛋白质水平降低,TM6SF2低表达组情况与之相反。(3)免疫组化结果显示,TM6SF2在As斑块存在阳性表达,阳性染色区域在中膜和增生的内膜中均有分布,以中膜居多;免疫荧光双标检测结果显示在人As斑块中TM6SF2表达与VSMCs存在共定位。【结论】在人VSMCs中存在TM6SF2表达,TM6SF2可以减轻oxLDL诱导的VSMCs脂质蓄积,其机制很可能与TM6SF2下调细胞Lox-1和CD36的表达有关。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54

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本文编号：2648836